最为成功。他们发现,注射的DNA在 肌细胞中以环状分子存在,不能复制, 亦不整合入宿主细胞的染色体中。这意 味着肌肉可用外源性DNA注射来做基 因治疗,但不能长久表达该基因;但是 肌肉内注射简单易行,故可以定期肌内 注射DNA。肌细胞是基因治疗的良好 靶细胞,特别对主要涉及肌肉的疾病, 如 Duchenne肌营养不良症(DMD) 但是对非原发于肌肉的疾病可能亦有 效 1.12磷酸钙共沉淀法 此方法由 Graham等人于1973年首 先建立的。当将氯化钙,DNA和磷酸 盐脂缓冲溶液(PBS)在一起缓慢混合 时,即有磷酸钙微细沉淀形成。如有培 养细胞存在时,形成的DNA-磷酸钙沉 淀物能附着在细胞膜上,并经过细胞内 吞作用而进入细胞浆中,并须通过溶酶 体。这些细胞事先要用氯化钙处理,使 其在与DNA样品混合时,核酸可以通 过细胞膜。然后继续培养并将转化子选 择出来。这种转化作用的主要好处是在 于其简单和普通性,其主要缺点是转化 频率通常很低(大约0.01-0.1%),故 需要有一个很强的选择性标志基因 由这类转移方法转入的DNA,大 多不整合入宿主细胞染色体,但能暂时 留在细胞核,以染色体外元件或附加体 的形式存在。最为成功。他们发现，注射的 DNA 在 肌细胞中以环状分子存在，不能复制， 亦不整合入宿主细胞的染色体中。这意 味着肌肉可用外源性 DNA 注射来做基 因治疗，但不能长久表达该基因；但是 肌肉内注射简单易行，故可以定期肌内 注射 DNA。肌细胞是基因治疗的良好 靶细胞，特别对主要涉及肌肉的疾病， 如 Duchenne 肌营养不良症（DMD）。 但是对非原发于肌肉的疾病可能亦有 效。 1.1.2 磷酸钙共沉淀法 此方法由Graham等人于1973年首 先建立的。当将氯化钙，DNA 和磷酸 盐脂缓冲溶液（PBS）在一起缓慢混合 时，即有磷酸钙微细沉淀形成。如有培 养细胞存在时，形成的 DNA-磷酸钙沉 淀物能附着在细胞膜上，并经过细胞内 吞作用而进入细胞浆中，并须通过溶酶 体。这些细胞事先要用氯化钙处理，使 其在与 DNA 样品混合时，核酸可以通 过细胞膜。然后继续培养并将转化子选 择出来。这种转化作用的主要好处是在 于其简单和普通性，其主要缺点是转化 频率通常很低（大约 0.01-0.1%），故 需要有一个很强的选择性标志基因。 由这类转移方法转入的 DNA，大 多不整合入宿主细胞染色体，但能暂时 留在细胞核，以染色体外元件或附加体 的形式存在