(5)加0.2 mL 新配的5 mg/mL NaBH4液,混匀,再置 4 ℃, 2h。 (6)在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵,置4 ℃ 1h。 (7)3000 r/min 离心半小时,弃上清。沉淀物用半饱 和硫酸铵洗二次,最后沉淀物溶于少量0.15moL/L pH7.4 的PBS中。 (8) 将上述溶液装入透析袋中,对0.15 moL/L pH7.4 的PB缓冲盐水透析,去除铵离子后(用萘氏试剂检测), 10,000 r/min 离心30 min 去除沉淀,上清液即为酶结合 物,分装后,冰冻保存。(5)加0.2 mL 新配的5 mg/mL NaBH4液,混匀,再置 4 ℃, 2h。 (6)在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵,置4 ℃ 1h。 (7)3000 r/min 离心半小时,弃上清。沉淀物用半饱 和硫酸铵洗二次,最后沉淀物溶于少量0.15moL/L pH7.4 的PBS中。 (8) 将上述溶液装入透析袋中,对0.15 moL/L pH7.4 的PB缓冲盐水透析,去除铵离子后(用萘氏试剂检测), 10,000 r/min 离心30 min 去除沉淀,上清液即为酶结合 物,分装后,冰冻保存