(3)转位再杂交 图 (4)进一步聚合 图 (5)非标准GG配对 图 七DNA复制的调控 八、DNA复制的真实性 《杨岐生》Pl44 生物体DNA复制具有高度真实性,复制10-10u碱基对只有一个错误碱基。 碱基对的自由能通常在413 KJ/mol,这样的自由能相当于平均参入100个核苷酸就可能出现一次错配, 仅靠 Watson-Crik双螺旋的碱基配对原则,突变率将髙达102。 DNA聚合酶对碱基的选择作用 酶的被动论:不同的核苷酸在聚合位点停留时间不同,正确的dNP能长时间停留,而参与聚合。DNA 聚合酶能依照模板的核苷酸,选择正确的dNP掺入引物末端 酶积极参与理论:DNA聚合酶对正确与错误的核苷酸,不仅亲和性不同,而且将它们插入DNA引物端 的速度也不同 动力学校阅读:在新的磷酸二酯键未形成时,dNP结合在酶与模板一引物复合物的聚合位点上,DNA 聚合酶能识别正确与错误的dNIP DNA聚合酶对底物的识别作用,DNA聚合酶有两种底物,一种是DNA模板一引物,另一种是dNIP。 DNA聚合酶先识别DNA模板和引物的3未端,再识别底物dNIP,是·种有序的识别过程。 2、3→5外切活性的校正阅读 E· coli dNapol.I和polⅢ有3→5外切活性,可删除错误插入的核苷酸。 缺失3→5外切活性的E. coli DNA poL. I,催化DNA合成时,出现错误的几率增髙5-50倍。因此,3 5外切活性可以使DNA复制的真实性,提高1-2个数量级 图１０ ⑶转位再杂交 图 ⑷进一步聚合 图 ⑸非标准 GG 配对 图 七、 DNA 复制的调控 八、 DNA 复制的真实性 《杨岐生》P144 生物体 DNA复制具有高度真实性，复制107 -1011碱基对,只有一个错误碱基。 碱基对的自由能通常在 4-13KJ/mol，这样的自由能相当于平均参入 100个核苷酸就可能出现一次错配， 仅靠 Watson-Crick 双螺旋的碱基配对原则，突变率将高达10-2 。 1、 DNA 聚合酶对碱基的选择作用 酶的被动论：不同的核苷酸在聚合位点停留时间不同，正确的dNTP 能长时间停留，而参与聚合。DNA 聚合酶能依照模板的核苷酸，选择正确的dNTP 掺入引物末端。 酶积极参与理论：DNA聚合酶对正确与错误的核苷酸，不仅亲和性不同，而且将它们插入DNA 引物端 的速度也不同。 动力学校正阅读：在新的磷酸二酯键未形成时，dNTP 结合在酶与模板—引物复合物的聚合位点上，DNA 聚合酶能识别正确与错误的dNTP。 DNA聚合酶对底物的识别作用，DNA聚合酶有两种底物，一种是 DNA 模板—引物，另一种是dNTP。 DNA 聚合酶先识别 DNA 模板和引物的3 ，未端，再识别底物dNTP，是一种有序的识别过程。 2、 3 ，→5 ，外切活性的校正阅读 E. coli. DNA pol.Ⅰ和pol.Ⅲ有3 ，→5 ，外切活性，可删除错误插入的核苷酸。 缺失 3 ， →5 ，外切活性的 E. coli. DNA pol.Ⅰ，催化 DNA合成时，出现错误的几率增高 5-50 倍。因此，3 ， →5 ，外切活性可以使DNA复制的真实性，提高1-2 个数量级。 图