9 浙江大学 遗传学第九章 49 ㈢、中断杂交试验及染色体连锁图： 50年代，雅科（Jacob F.）和沃尔曼（Wollman E.）： 中断杂交试验：发现接合时遗传物质转移是直线进行。 其方法为： ⑴．Hfr菌株与F－菌株混合培养。 Hfr菌株：strs a+ b+ c+ d+ 对链霉素敏感 F- 菌株： strr a- b- c- d- 抗链霉素 ⑵．不同时间取样 搅拌器中断杂交 稀释 含链霉素完全培养基 杀死Hfr细菌 抗str细菌 菌落 影印培养法：鉴定a+b+c+d+各基因转移时间。 ⑶．实例： Hfr菌株：苏氨酸(thr+)、亮氨酸 (leu+)、抗叠氮化物(azir )、 抗T1噬菌体(tonr )、半乳糖 (gal b+)、乳糖(lac+)。 F- 菌株：thr- 、leu- 、azis 、tons 、 galb- 、lac- 型。 ①．8分钟时：thr+进入F- 细胞； 8.5分钟时：leu+进入F- 细胞； ②．9分钟时：出现叠氮化物抗性 的菌落，少数azir 基因进入F- 细胞； ③．11分钟时：出现抗噬菌体T1的 F- 细菌； ④．18和25分钟时：分别出现乳糖 和半乳糖发酵基因，即lac+和 gal b+进入F- 细胞。 8 8.5 9 11 18 浙江大学 遗传学第九章 51 ①．重组体中各标志基因进 入F- 细胞中时间不同， 达到最高水平的时间也 不同； ②．随时间的推迟，某个基 因的重组率增加；一定 程度后，重组率便不再 增加。 如：10’tonr 首次出现， 15’时 40%、25’后80%。 ∴Hfr中基因是按一定的线性 顺序依次进入F- 菌株的。 浙江大学 遗传学第九章 52 thr leu azi ton lac gal F O 8 8.5 9 11 18 25 时间(分钟) 以基因出现的时间为标准 ¨ 作出E. coli的遗传连锁图。 表 9-5 大肠杆菌 Hfr thr+ leu+ lac+ gal+ azis tons strs × F－ thr－ leu－ lac－ gal－ azir tonr strr 的结果 标记基因 转入的时间（分钟） 频率 thr+ 8 100(经选择的) leu+ 8.5 100(经选择的) azis 9 90 tons 11 70 lac+ 18 40 gal+ 25 25 浙江大学 遗传学第九章 53 ⑷．用一种大肠杆菌的不同Hfr菌株进行中断杂交实验，作出 连锁图，其基因向F-细胞转移的顺序不同。 ─────────────────────────── Hfr类型 原点 基因转移顺序 ─────────────────────────── HfrH O thr pro lac pur gal his gly thi 1 O thr thi gly his gal pur lac pro 2 O pro thr thi gly his gal pur lac 3 O pur lac pro thr thi gly his gal AB312 O thi thr pro lac gur gal his gly ─────────────────────────── 转移的顺序是不是随机？例如：thr thi gly 。 浙江大学 遗传学第九章 54 Hfr1和HfrAB312菌系的中断杂交试验及其连锁图： 开始 开始 结束 结束9 浙江大学 遗传学第九章 49 ㈢、中断杂交试验及染色体连锁图： 50年代，雅科（Jacob F.）和沃尔曼（Wollman E.）： 中断杂交试验：发现接合时遗传物质转移是直线进行。 其方法为： ⑴．Hfr菌株与F－菌株混合培养。 Hfr菌株：strs a+ b+ c+ d+ 对链霉素敏感 F- 菌株： strr a- b- c- d- 抗链霉素 ⑵．不同时间取样 搅拌器中断杂交 稀释 含链霉素完全培养基 杀死Hfr细菌 抗str细菌 菌落 影印培养法：鉴定a+b+c+d+各基因转移时间。 ⑶．实例： Hfr菌株：苏氨酸(thr+)、亮氨酸 (leu+)、抗叠氮化物(azir )、 抗T1噬菌体(tonr )、半乳糖 (gal b+)、乳糖(lac+)。 F- 菌株：thr- 、leu- 、azis 、tons 、 galb- 、lac- 型。 ①．8分钟时：thr+进入F- 细胞； 8.5分钟时：leu+进入F- 细胞； ②．9分钟时：出现叠氮化物抗性 的菌落，少数azir 基因进入F- 细胞； ③．11分钟时：出现抗噬菌体T1的 F- 细菌； ④．18和25分钟时：分别出现乳糖 和半乳糖发酵基因，即lac+和 gal b+进入F- 细胞。 8 8.5 9 11 18 浙江大学 遗传学第九章 51 ①．重组体中各标志基因进 入F- 细胞中时间不同， 达到最高水平的时间也 不同； ②．随时间的推迟，某个基 因的重组率增加；一定 程度后，重组率便不再 增加。 如：10’tonr 首次出现， 15’时 40%、25’后80%。 ∴Hfr中基因是按一定的线性 顺序依次进入F- 菌株的。 浙江大学 遗传学第九章 52 thr leu azi ton lac gal F O 8 8.5 9 11 18 25 时间(分钟) 以基因出现的时间为标准 ¨ 作出E. coli的遗传连锁图。 表 9-5 大肠杆菌 Hfr thr+ leu+ lac+ gal+ azis tons strs × F－ thr－ leu－ lac－ gal－ azir tonr strr 的结果 标记基因 转入的时间（分钟） 频率 thr+ 8 100(经选择的) leu+ 8.5 100(经选择的) azis 9 90 tons 11 70 lac+ 18 40 gal+ 25 25 浙江大学 遗传学第九章 53 ⑷．用一种大肠杆菌的不同Hfr菌株进行中断杂交实验，作出 连锁图，其基因向F-细胞转移的顺序不同。 ─────────────────────────── Hfr类型 原点 基因转移顺序 ─────────────────────────── HfrH O thr pro lac pur gal his gly thi 1 O thr thi gly his gal pur lac pro 2 O pro thr thi gly his gal pur lac 3 O pur lac pro thr thi gly his gal AB312 O thi thr pro lac gur gal his gly ─────────────────────────── 转移的顺序是不是随机？例如：thr thi gly 。 浙江大学 遗传学第九章 54 Hfr1和HfrAB312菌系的中断杂交试验及其连锁图： 开始 开始 结束 结束