2、酚抽提法 酚作为蛋白变性剂,同时抑制了 DNase的降解作用。现有许多派生的方 法 (1)酚水法一般向溶液中加入等体积用水或缓冲溶液饱和的重蒸酚(除 去氧化物醌),在室温下或低温下摇动混合。变性蛋白分子表面由于含有很 多极性基团与苯酚相似相溶,从而变性蛋白分子(以及细胞残渣)溶于酚相 ,而核酸和多糖溶于水相。其中间为不溶性变性蛋白质。离心分层后取出水 层,多次重复操作,直至中间层无明显变性蛋白为止。然后合并含DNA的 水相,利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇沉淀核酸。此法的特点是使提取 的DNA保持天然状态。 受pH影响很大,若pH为中性 NA+RNA偏酸,利于RNA的抽提;若 四pH略偏碱,利于DNA的抽提 proteins) 。例如,DNA在水饱和酚的 Phenol 酸性条件下容易留在有机相 Cell extract Separate layers 。因此,DNA和RNA的酚抽 by centrifugation 提法的pH值是不同的。 酚抽提法示意图2、酚抽提法: 酚作为蛋白变性剂，同时抑制了DNase的降解作用。现有许多派生的方 法。 （1）酚水法 一般向溶液中加入等体积用水或缓冲溶液饱和的重蒸酚（除 去氧化物醌），在室温下或低温下摇动混合。变性蛋白分子表面由于含有很 多极性基团与苯酚相似相溶，从而变性蛋白分子（以及细胞残渣）溶于酚相 ，而核酸和多糖溶于水相。其中间为不溶性变性蛋白质。离心分层后取出水 层，多次重复操作，直至中间层无明显变性蛋白为止。然后合并含DNA 的 水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀核酸 。此法的特点是使提取 的DNA保持天然状态 。 酚抽提法示意图 受pH影响很大，若pH为中性 偏酸，利于RNA的抽提；若 pH略偏碱，利于DNA的抽提 。例如，DNA在水饱和酚的 酸性条件下容易留在有机相 。因此，DNA和RNA的酚抽 提法的pH值是不同的