四环素抗性基因 BamH I 质粒 Bcl I +BamH I HimdⅢ 启动子 氨苄青霉素 抗性基因 图1 引物甲 BamH Hind III ☑→ ←国☐→ Bcl I Sau3A I 引物丙引物乙 目的基 图2 (1)用上图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用 这2种限 制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过 酶作用后获得重组质 粒。 (2)为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添 加 平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中的 和 (3)若BamH I酶切的DNA末端与BclI酶切的DNA末端连接，连接部位的6 个碱基对序列为 对于该部位，这两种酶」 (填“都 能“都不能”或“只有一种能)切开。 (4)若用Sau3AI切割图1质粒，最多可获得 种大小不同的DNA片段。 答案：(I)BclI和HindIII DNA连接 (2)四环素引物甲引物丙 G GATC A (3)T GATC CA CTAG G 都不能 C CTAG (4)7 解析：(1)构建基因表达载体时，需要用限制酶和DNA连接酶。质粒上有四环素抗 性基因和氨苄青霉素抗性基因，若用BamH I切割，则2个抗性基因都将被破坏， 质粒和目的基因所在的DNA片段都有BclI和HimdⅢ的切割位，点，且四环素抗 性基因上无这2种酶的切割位点，故应用BclI和HidⅢ2种限制酶切割。(2)由 ()知，氨苄青霉素抗性基因已经被破坏，四环素抗性基因完好，故应在培养基中添 加四环素。PCR要求2种引物分别和目的基因的2条单链结合，沿相反的方向合 成子链。(3)根据BamH I和BclI的切割位，点，BamH I酶切的DNA末端与 BClI酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为T GATC C(1)用上图中质粒和目的基因构建重组质粒,应选用 这 2 种限 制酶切割,酶切后的载体和目的基因片段,通过 酶作用后获得重组质 粒。 (2)为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌,应在筛选平板培养基中添 加 ,平板上长出的菌落,常用 PCR 鉴定,所用的引物组成为图 2 中的 和 。 (3)若 BamH Ⅰ酶切的 DNA 末端与 Bcl Ⅰ酶切的 DNA 末端连接,连接部位的 6 个碱基对序列为 ,对于该部位,这两种酶 (填“都 能”“都不能”或“只有一种能”)切开。 (4)若用 Sau3A Ⅰ切割图 1 质粒,最多可获得 种大小不同的 DNA 片段。 答案:(1)BclⅠ和 HindⅢ DNA 连接 (2)四环素 引物甲 引物丙 (3)T GATC CA CTAG G( G GATC A C CTAG T ) 都不能 (4)7 解析:(1)构建基因表达载体时,需要用限制酶和 DNA 连接酶。质粒上有四环素抗 性基因和氨苄青霉素抗性基因,若用 BamH Ⅰ 切割,则 2 个抗性基因都将被破坏, 质粒和目的基因所在的 DNA 片段都有 BclⅠ和 HindⅢ的切割位点,且四环素抗 性基因上无这 2 种酶的切割位点,故应用 BclⅠ和 HindⅢ 2 种限制酶切割。(2)由 (1)知,氨苄青霉素抗性基因已经被破坏,四环素抗性基因完好,故应在培养基中添 加四环素。PCR 要求 2 种引物分别和目的基因的 2 条单链结合,沿相反的方向合 成子链。(3)根据 BamH Ⅰ和 Bcl Ⅰ的切割位点,BamH Ⅰ酶切的 DNA 末端与 BclⅠ酶切的 DNA 末端连接,连接部位的 6 个碱基对序列为 T GATC C