生物化学实验大纲医学院基础医学系医学机能实验中心大纲制定人：张春军，罗星英文课程名称生物化学Biochemistry Experiment课程编码1037740名称32项实验总学时45学时开设实验项目数课程性质医学基础实验课实验教材或指导书医学机能实验学笔试适用专业临床医学、预防医实验考核方式学、检验本科开出实验项目序号实验类型学时实验项目名称31验证性纸层析鉴定转氨基作用26验证性温度对酶活性的影响,激活剂和抑制剂的影响,PH的影响33蛋白质等电点的测定验证性43设计性精氨酸酶的作用53设计性琥珀酸对丙二酸的竞争性抑制作用63综合性碱性磷酸酶的纯化73碱性磷酸酶比活性测定综合性83综合性碱性磷酸酶蛋白含量测定93综合性碱性磷酸酶的Km测定103综合性血清v-球蛋白的盐析分离113综合性血清V-球蛋白凝胶层析脱盐123综合性离子交换层析纯化血清V-球蛋白133综合性电泳鉴定纯化的血清V-球蛋白143综合性血清v-球蛋白的紫外分光光度法定量153综合性血清总胆固醇测定163综合性甘油三酯的测定173综合性脂肪的消化作用183综合性血清脂蛋白琼脂糖电泳193综合性脂类的薄层层析1
1 生物化学实验大纲 医学院 基础医学系 医学机能实验中心 大纲制定人：张春军，罗星 课程名称 生物化学 英 文 名称 Biochemistry Experiment 课程编码 1037740 实验总学时 45 学时 开设实验项目数 32 项 课程性质 医学基础实验课 实验教材或指导书 医学机能实验学 实验考核方式 笔试 适用专业 临床医学、预防医 学、检验本科 开出实验项目 序号 实验项目名称 实验类型 学时 1 纸层析鉴定转氨基作用 验证性 3 2 温度对酶活性的影响,激活剂和抑制剂的影响,PH的影响 验证性 6 3 蛋白质等电点的测定 验证性 3 4 精氨酸酶的作用 设计性 3 5 琥珀酸对丙二酸的竞争性抑制作用 设计性 3 6 碱性磷酸酶的纯化 综合性 3 7 碱性磷酸酶比活性测定 综合性 3 8 碱性磷酸酶蛋白含量测定 综合性 3 9 碱性磷酸酶的Km测定 综合性 3 10 血清v-球蛋白的盐析分离 综合性 3 11 血清v-球蛋白凝胶层析脱盐 综合性 3 12 离子交换层析纯化血清v-球蛋白 综合性 3 13 电泳鉴定纯化的血清v-球蛋白 综合性 3 14 血清v-球蛋白的紫外分光光度法定量 综合性 3 15 血清总胆固醇测定 综合性 3 16 甘油三酯的测定 综合性 3 17 脂肪的消化作用 综合性 3 18 血清脂蛋白琼脂糖电泳 综合性 3 19 脂类的薄层层析 综合性 3
203综合性酮体的生成和利用213综合性核酸的提取(盐析,无机溶剂法)223综合性核酸的纯化(无机溶剂法)233综合性核酸的浓缩(醇法)243综合性DNA,RNA的定量(紫外分光光度法）253综合性核酸的凝胶电泳263综合性酵母RNA的提取和鉴定273血糖的测定(邻一甲苯胺法)综合性283综合性葡萄糖标准曲线的制备及回收实验293综合性胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响303综合性饱食与饥饿对肝糖原含量的影响313红细胞糖酵解的测定综合性323综合性运动对血中乳酸含量的变化纸层析法鉴定转氨基作用实验?实验类型学时3学时开出时间2人2人计划每组人数现在每组人数实验的目的：用纸层析法鉴定转氨基作用2
2 20 酮体的生成和利用 综合性 3 21 核酸的提取(盐析,无机溶剂法) 综合性 3 22 核酸的纯化(无机溶剂法) 综合性 3 23 核酸的浓缩(醇法) 综合性 3 24 DNA,RNA的定量(紫外分光光度法) 综合性 3 25 核酸的凝胶电泳 综合性 3 26 酵母RNA的提取和鉴定 综合性 3 27 血糖的测定(邻—甲苯胺法) 综合性 3 28 葡萄糖标准曲线的制备及回收实验 综合性 3 29 胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响 综合性 3 30 饱食与饥饿对肝糖原含量的影响 综合性 3 31 红细胞糖酵解的测定 综合性 3 32 运动对血中乳酸含量的变化 综合性 3 纸层析法鉴定转氨基作用 实 验 实验类型 ① 学时 3 学时 开出时间 计划每组人数 2 人 现在每组人数 2 人 实验的目的： 用纸层析法鉴定转氨基作用
实验的内容：观察α-酮酸与丙氨酸在肝脏谷丙转氨酶催化下的转氨基作用实验操作要点及注意事项：1.酶液的制备2.取圆形滤纸一张，点样时，斑点不可过大，而且每点一滴，用吹风机吹干后方可点第2滴3.纸芯不可以突出滤纸面主要仪器设备序号规格型号数量金额主要设备名称购置日期16玻璃组织匀浆器22水浴箱3水浴锅444吹风机5Conmay I126喷雾器4注：实验类型包括：①基础操作训练②验证性实验③综合性实验④设计性实验开放实验③其它类型实验精氨酸酶的作用实验实验类型@「学时3学时开出时间2人2人计划每组人数现在每组人数3
3 实验的内容： 观察 α-酮酸与丙氨酸在肝脏谷丙转氨酶催化下的转氨基作用 实验操作要点及注意事项： 1. 酶液的制备 2. 取圆形滤纸一张，点样时，斑点不可过大，而且每点一滴，用吹风机吹干后方可点第 2 滴 3. 纸芯不可以突出滤纸面 主要仪器设备 序号 主要设备名称 规格型号 数量 金额 购置日期 1 玻璃组织匀浆器 6 2 水浴箱 2 3 水浴锅 4 4 吹风机 4 5 Conmay 皿 12 6 喷雾器 4 注：实验类型包括：①基础操作训练 ②验证性实验 ③综合性实验 ④设计性实验 ⑤开放实验 ⑥其它类型 实验 精氨酸酶的作用 实 验 实验类型 ① 学时 3 学时 开出时间 计划每组人数 2 人 现在每组人数 2 人
实验的目的：间接测定精氨酸酶的活性实验的内容：1.肝匀浆的配置2.取Conway氏扩散Ⅲ，分别标记测定和对照，按顺序加入试剂3.比较测定皿和对照血的颜色实验操作要点及注意事项：取肝匀浆煮沸后冷却备用1.2.勿使内室和外室试剂相混3.按顺序加入试剂主要仪器设备序号数量主要设备名称规格型号金额购置日期16玻璃组织匀浆器212Conway氏扩散皿3恒温箱2注：实验类型包括：①基础操作训练②验证性实验③综合性实验④设计性实验开放实验③其它类型实验酶的影响因素实验@学时实验类型开出时间3学时计划每组人数2人现在每组人数2人4
4 实验的目的： 间接测定精氨酸酶的活性 实验的内容： 1. 肝匀浆的配置 2. 取 Conway 氏扩散皿，分别标记测定和对照，按顺序加入试剂 3. 比较测定皿和对照皿的颜色 实验操作要点及注意事项： 1. 取肝匀浆煮沸后冷却备用 2. 勿使内室和外室试剂相混 3. 按顺序加入试剂 主要仪器设备 序号 主要设备名称 规格型号 数量 金额 购置日期 1 玻璃组织匀浆器 6 2 Conway 氏扩散皿 12 3 恒温箱 2 注：实验类型包括：①基础操作训练 ②验证性实验 ③综合性实验 ④设计性实验 ⑤开放实验 ⑥其它类型 实验 酶的影响因素 实 验 实验类型 ① 学时 3 学时 开出时间 计划每组人数 2 人 现在每组人数 2 人
实验的目的：掌握对酶活性的影响因素实验的内容：1.温度对酶活性的影响因素2.抑制剂和激活剂对酶活性的影响因素3.PH对酶活性的影响实验操作要点及注意事项：1.严格按照操作顺序2.注意试剂的名称3.分析结果，认真比较各管的颜色变化主要仪器设备序号数量主要设备名称规格型号金额购置日期1水浴锅42PH计4注：实验类型包括：①基础操作训练②验证性实验③综合性实验④设计性实验③开放实验③其它类型实验琥珀酸对丙二酸的竞争性抑制作用月实验?学时实验类型3学时开出时间计划每组人数2人现在每组人数2人15
5 实验的目的： 掌握对酶活性的影响因素 实验的内容： 1. 温度对酶活性的影响因素 2. 抑制剂和激活剂对酶活性的影响因素 3. PH 对酶活性的影响 实验操作要点及注意事项： 1. 严格按照操作顺序 2. 注意试剂的名称 3. 分析结果，认真比较各管的颜色变化 主要仪器设备 序号 主要设备名称 规格型号 数量 金额 购置日期 1 水浴锅 4 2 PH 计 4 注：实验类型包括：①基础操作训练 ②验证性实验 ③综合性实验 ④设计性实验 ⑤开放实验 ⑥其它类型 实验 琥珀酸对丙二酸的竞争性抑制作用 实 验 实验类型 ③ 学时 3 学时 开出时间 计划每组人数 2 人 现在每组人数 2 人
实验的目的：掌握竞争性抑制作用实验的内容：1.肌肉提取液的制备2.按照样品顺序加入试剂3.将各管摇匀，静置于37℃水浴中保温，随时观察各管褪色情况，并作出记录实验操作要点及注意事项：用干净大试管5支分别加样，注意试管要匹配，可用笔作好标记1.2.加样时，可横着加样，避免污染试剂和吸管摇匀后，手溶液上滴加液体石蜡，以隔绝空气3.主要仪器设备序号数量金额主要设备名称规格型号购置日期1组织匀浆器622恒温水浴箱注：实验类型包括：①基础操作训练②验证性实验③综合性实验④设计性实验③开放实验③其它类型实验碱性磷酸酶实验实验类型?学时开出时间12学时计划每组人数2人2人现在每组人数6
6 实验的目的： 掌握竞争性抑制作用 实验的内容： 1. 肌肉提取液的制备 2. 按照样品顺序加入试剂 3. 将各管摇匀，静置于 37℃水浴中保温，随时观察各管褪色情况，并作出记录 实验操作要点及注意事项： 1. 用干净大试管 5 支分别加样,注意试管要匹配，可用笔作好标记 2. 加样时，可横着加样，避免污染试剂和吸管 3. 摇匀后，于溶液上滴加液体石蜡，以隔绝空气 主要仪器设备 序号 主要设备名称 规格型号 数量 金额 购置日期 1 组织匀浆器 6 2 恒温水浴箱 2 注：实验类型包括：①基础操作训练 ②验证性实验 ③综合性实验 ④设计性实验 ⑤开放实验 ⑥其它类型 实验 碱性磷酸酶 实 验 实验类型 ③ 学时 12 学时 开出时间 计划每组人数 2 人 现在每组人数 2 人
实验的目的：掌握酶的纯化、比活性、酶蛋白含量测定和酶Km值测定的原理与方法实验的内容：碱性磷酸酶酶的纯化1.碱性磷酸酶比活性测定2.3碱性磷酸酶蛋白含量测定碱性磷酸酶Km值测定（含数据的微机优化处理）4.实验操作要点及注意事项：酶的纯化所用有机试剂必须预先冷冻，所有离心均为冷冻离心1.2.比活性测定时取量要准确3.双缩脲比色法测蛋白含量，制备标准曲线要准确Km值测定时呈色反应必须充分混合4.主要仪器设备序号数量主要设备名称规格型号金额购置日期1低温冰箱42分光光度计722631冷冻离心机4微机45低温匀浆器4注：实验类型包括：①基础操作训练②验证性实验③综合性实验④设计性实验③开放实验③其它类型实验纸层析法鉴定转氨基作用实验学时实验类型@3学时开出时间7
7 实验的目的： 掌握酶的纯化、比活性、酶蛋白含量测定和酶 Km 值测定的原理与方法 实验的内容： 1. 碱性磷酸酶酶的纯化 2. 碱性磷酸酶比活性测定 3. 碱性磷酸酶蛋白含量测定 4. 碱性磷酸酶 Km 值测定（含数据的微机优化处理） 实验操作要点及注意事项： 1. 酶的纯化所用有机试剂必须预先冷冻，所有离心均为冷冻离心 2. 比活性测定时取量要准确 3. 双缩脲比色法测蛋白含量，制备标准曲线要准确 4. Km 值测定时呈色反应必须充分混合 主要仪器设备 序号 主要设备名称 规格型号 数量 金额 购置日期 1 低温冰箱 4 2 分光光度计 722 6 3 冷冻离心机 1 4 微机 4 5 低温匀浆器 4 注：实验类型包括：①基础操作训练 ②验证性实验 ③综合性实验 ④设计性实验 ⑤开放实验 ⑥其它类型 实验 纸层析法鉴定转氨基作用 实 验 实验类型 ① 学时 3 学时 开出时间
2人计划每组人数2人现在每组人数实验的目的：用纸层析法鉴定转氨基作用实验的内容：观察α-酮酸与丙氨酸在肝脏谷丙转氨酶催化下的转氨基作用实验操作要点及注意事项：1.酶液的制备2.取圆形滤纸一张，点样时，斑点不可过大，而且每点一滴，用吹风机吹干后方可点第2滴3.纸芯不可以突出滤纸面主要仪器设备序号规格型号数量金额主要设备名称购置日期1玻璃组织匀浆器622水浴箱34水裕锅4吹风机4512Conmay II46喷雾器注：实验类型包括：①基础操作训练②验证性实验③综合性实验④设计性实验③开放实验③其它类型实验酶的影响因素实验8
8 计划每组人数 2 人 现在每组人数 2 人 实验的目的： 用纸层析法鉴定转氨基作用 实验的内容： 观察 α-酮酸与丙氨酸在肝脏谷丙转氨酶催化下的转氨基作用 实验操作要点及注意事项： 1. 酶液的制备 2. 取圆形滤纸一张，点样时，斑点不可过大，而且每点一滴，用吹风机吹干后方可点第 2 滴 3. 纸芯不可以突出滤纸面 主要仪器设备 序号 主要设备名称 规格型号 数量 金额 购置日期 1 玻璃组织匀浆器 6 2 水浴箱 2 3 水裕锅 4 4 吹风机 4 5 Conmay 皿 12 6 喷雾器 4 注：实验类型包括：①基础操作训练 ②验证性实验 ③综合性实验 ④设计性实验 ⑤开放实验 ⑥其它类型 实验 酶的影响因素 实 验
实验类型学时开出时间3学时2人2人计划每组人数现在每组人数实验的目的：掌握对酶活性的影响因素实验的内容：1.温度对酶活性的影响因素2.抑制剂和激活剂对酶活性的影响因素3.PH对酶活性的影响实验操作要点及注意事项：1.严格按照操作顺序2.注意试剂的名称3.分析结果，认真比较各管的颜色变化主要仪器设备序号数量主要设备名称规格型号金额购置日期水浴锅142PH计4注：实验类型包括：①基础操作训练②验证性实验③综合性实验④设计性实验开放实验③其它类型实验蛋白质等电点的测定实验实验类型「学时」②3学时开出时间9
9 实验类型 ① 学时 3 学时 开出时间 计划每组人数 2 人 现在每组人数 2 人 实验的目的： 掌握对酶活性的影响因素 实验的内容： 1. 温度对酶活性的影响因素 2. 抑制剂和激活剂对酶活性的影响因素 3. PH 对酶活性的影响 实验操作要点及注意事项： 1. 严格按照操作顺序 2. 注意试剂的名称 3. 分析结果，认真比较各管的颜色变化 主要仪器设备 序号 主要设备名称 规格型号 数量 金额 购置日期 1 水浴锅 4 2 PH 计 4 注：实验类型包括：①基础操作训练 ②验证性实验 ③综合性实验 ④设计性实验 ⑤开放实验 ⑥其它类型 实验 蛋白质等电点的测定 实 验 实验类型 ② 学时 3 学时 开出时间
计划每组人数2人现在每组人数2人实验的目的：掌握沉淀法测蛋白质等电点的原理与方法实验的内容：1.深理解蛋白质等电点的概念和蛋白质稳定因素2.用沉淀法测定蛋白质的等电点初步认识其它测定等电点的方法：等电聚焦法，生物信息学方法3.实验操作要点及注意事项：试管5支分别加样，注意试管要匹配，可用笔作好标记1.加样时，可横着加样，避免污染试剂和吸管2。摇匀后，静置约20分钟。可用旋转法混匀试剂，注意混荡均匀3.3要注意试剂和吸管的摆放位置，防止被污染4.主要仪器设备序号数量金额主要设备名称规格型号购置日期1PH仪45注：实验类型包括：①基础操作训练②验证性实验③综合性实验④设计性实验③开放实验③其它类型实验月实验精氨酸酶的作用①学时3学时实验类型开出时间10
10 计划每组人数 2 人 现在每组人数 2 人 实验的目的： 掌握沉淀法测蛋白质等电点的原理与方法 实验的内容： 1． 深理解蛋白质等电点的概念和蛋白质稳定因素 2． 用沉淀法测定蛋白质的等电点 3． 初步认识其它测定等电点的方法：等电聚焦法，生物信息学方法 实验操作要点及注意事项： 1． 试管 5 支分别加样,注意试管要匹配，可用笔作好标记 2。加样时，可横着加样，避免污染试剂和吸管 3．摇匀后，静置约 20 分钟。可用旋转法混匀试剂，注意混荡均匀 4．要注意试剂和吸管的摆放位置，防止被污染 主要仪器设备 序号 主要设备名称 规格型号 数量 金额 购置日期 1 PH 仪 4 5 注：实验类型包括：①基础操作训练 ②验证性实验 ③综合性实验 ④设计性实验 ⑤开放实验 ⑥其它类型 实验 精氨酸酶的作用 实 验 实验类型 ① 学时 3 学时 开出时间