实验室生物安全手册第三版世界卫生组织
实验室生物安全手册第三版世界卫生组织日内瓦2004
实验室 生物安全手册 第三版 世界卫生组织 日内瓦 2004
本手册的出版得到了美国疾病控制与预防中心（CDC，Atlanta，GA，USA）第U50/CCU012445-08号资助合作协议的支持。本手册的内容概由作者负责，不代表CDC的官方意见。世界卫生组织2004版权所有。本卫生信息产品仅供有限的受众使用。不得以任何形式或任何手段，对本产品的部分或全部内容进行评论、摘要、引用、复制、传递、分布、翻译或改写。本出版物采用的名称和陈述的材料并不代表世界卫生组织对任何国家、领地、城市或地区或其当局的合法地位，或有关边界或分界线的规定有任何意见。地图上的虚线表示可能尚未完全达成一致的大致边界线。凡提及某些公司或某些制造商的产品时，并不意味着他们已为世界卫生组织所认可或推荐，或比其它未提及的同类公司或产品更好。除差错和蔬漏外，凡专利产品名称第一个字母均用大写字母，以示区别。世界卫生组织不保证本出版物中所含信息的完整性和正确性，对因使用这些信息造成的任何损失概不负责。i
ii 本手册的出版得到了美国疾病控制与预防中心（CDC, Atlanta, GA, USA）第 U50/CCU012445-08 号资助/ 合作协议的支持。本手册的内容概由作者负责，不代表 CDC 的官方意见。 © 世界卫生组织 2004 版权所有。 本卫生信息产品仅供有限的受众使用。不得以任何形式或任何手段，对本产品的部分或全部内容进行评论、摘要、引 用、复制、传递、分布、翻译或改写。 本出版物采用的名称和陈述的材料并不代表世界卫生组织对任何国家、领地、城市或地区或其当局的合法地位，或有 关边界或分界线的规定有任何意见。地图上的虚线表示可能尚未完全达成一致的大致边界线。 凡提及某些公司或某些制造商的产品时，并不意味着他们已为世界卫生组织所认可或推荐，或比其它未提及的同类公 司或产品更好。除差错和疏漏外，凡专利产品名称第一个字母均用大写字母，以示区别。 世界卫生组织不保证本出版物中所含信息的完整性和正确性，对因使用这些信息造成的任何损失概不负责
目录序vii致谢ix总则第1章引言第一部分生物安全指南第2章微生物危险度评估..信息有限的标本危险度评估与遗传修饰微生物f第3章基础实验室一级和二级生物安全水平0操作规范实验室的设计和设施1.1实验室设备13健康和医学监测15培训.15废弃物处理16化学品、火、电、辐射以及仪器设备安全17三级生物安全水平第4章防护实验室-.18操作规范18实验室的设计和设施18实验室设备19健康和医学监测19第5章最高防护实验室-四级生物安全水平22.22操作规范实验室的设计和设施22第6章实验动物设施...25动物设施级生物安全水平26动物设施二级生物安全水平26动物设施三级生物安全水平27动物设施四级生物安全水平27无脊椎动物28ii
iii 目录 序 . ⅷ 致谢 . ⅸ 第 1 章 总则 . 1 引言 . 1 第一部分 生物安全指南 第 2 章 微生物危险度评估 . 7 信息有限的标本 . 7 危险度评估与遗传修饰微生物 . 8 第 3 章 基础实验室——一级和二级生物安全水平 . 9 操作规范 . 9 实验室的设计和设施 . 11 实验室设备 . 13 健康和医学监测 . 15 培训 . 15 废弃物处理 . 16 化学品、火、电、辐射以及仪器设备安全 . 17 第 4 章 防护实验室——三级生物安全水平 . 18 操作规范 . 18 实验室的设计和设施 . 18 实验室设备 . 19 健康和医学监测 . 19 第 5 章 最高防护实验室——四级生物安全水平 . 22 操作规范 . 22 实验室的设计和设施 . 22 第 6 章 实验动物设施 . 25 动物设施——一级生物安全水平 . 26 动物设施——二级生物安全水平 . 26 动物设施——三级生物安全水平 . 27 动物设施——四级生物安全水平 . 27 无脊椎动物 . 28
实验室生物安全手册第7章实验室/动物设施试运行指南29第8章实验室/动物设施认证指南31第二部分实验室生物安全保障第9章实验室生物安全保障的概念41第三部分实验室设备第10章生物安全柜45I级生物安全柜·46ⅡI级生物安全柜…：4649Ⅲ级生物安全柜生物安全柜的通风连接4949生物安全柜的选择实验室中生物安全柜的使用50第11章安全设备53负压柔性薄膜隔离装置54移液辅助器54...匀浆器、摇床、搅拌器和超声处理器55一次性接种环….55微型加热器55.个体防护装备和防护服55第四部分微生物学操作技术规范实验室技术第12章61实验室中标本的安全操作61移液管和移液辅助器的使用61避免感染性物质的扩散62生物安全柜的使用62...避免感染性物质的食入以及与皮肤和眼睛的接触62避免感染性物质的注入63血清的分离63离心机的使用63匀浆器、摇床、搅拌器和超声处理器的使用6464组织研磨器的使用.冰箱与冰柜的维护和使用64装有冻干感染性物质安的开启64装有感染性物质安甄的储存65iv
实验室生物安全手册 iv 第 7 章 实验室∕动物设施试运行指南 . 29 第 8 章 实验室∕动物设施认证指南 . 31 第二部分 实验室生物安全保障 第 9 章 实验室生物安全保障的概念 . 41 第三部分 实验室设备 第 10 章 生物安全柜 . 45 Ⅰ级生物安全柜 . 46 Ⅱ级生物安全柜 . 46 Ⅲ级生物安全柜 . 49 生物安全柜的通风连接 . 49 生物安全柜的选择 . 4 9 实验室中生物安全柜的使用 . 50 第 11 章 安全设备 . 53 负压柔性薄膜隔离装置 . 54 移液辅助器 . 54 匀浆器、摇床、搅拌器和超声处理器 . 55 一次性接种环 . 55 微型加热器 . 55 个体防护装备和防护服 . 55 第四部分 微生物学操作技术规范 第 12 章 实验室技术 . 61 实验室中标本的安全操作 . 61 移液管和移液辅助器的使用 . 61 避免感染性物质的扩散 . 62 生物安全柜的使用 . 62 避免感染性物质的食入以及与皮肤和眼睛的接触 . 62 避免感染性物质的注入 . 63 血清的分离 . 63 离心机的使用 . 63 匀浆器、摇床、搅拌器和超声处理器的使用 . 64 组织研磨器的使用 . 64 冰箱与冰柜的维护和使用 . 64 装有冻干感染性物质安瓿的开启 . 64 装有感染性物质安瓿的储存 . 65
目录对血液和其他体液、组织及排泄物的标准防护方法65对可能含有蛋白物质的防护66第13章意外事故应对方案和应急程序..68意外事故应对方案68...微生物实验室应急程序68第14章消毒和灭菌71定义..71实验室材料的清洁71化学杀菌剂.72清除局部环境的污染75清除生物安全柜的污染76洗手/清除手部污染76热力消毒和灭菌76焚烧78......废弃物处理78第15章感染性物质的运输79国际运输规定79基本的三层包装系统79-溢出清除程序81-第五部分生物技术介绍第16章生物安全和重组DNA技术85生物表达系统的生物安全考虑85表达载体的生物安全考虑85用于基因转移的病毒载体85转基因动物和“基因敲除”动物86转基因植物86遗传修饰生物体的危险度评估86进一步的考虑87第六部分化学品、火和电的安全第17章危害性化学品91暴露途径91化学品的储存91关于不相容化学品的一般原则9191化学品的毒性作用爆炸性化学品92化学品溢出92
目录 v 对血液和其他体液、组织及排泄物的标准防护方法 . 65 对可能含有朊蛋白物质的防护 . 66 第 13 章 意外事故应对方案和应急程序 . 68 意外事故应对方案 . 68 微生物实验室应急程序 . 68 第 14 章 消毒和灭菌 . 71 定义 . 71 实验室材料的清洁 . 71 化学杀菌剂 . 72 清除局部环境的污染 . 75 清除生物安全柜的污染 . 76 洗手／清除手部污染 . 76 热力消毒和灭菌 . 76 焚烧 . 78 废弃物处理 . 78 第 15 章 感染性物质的运输 . 79 国际运输规定 . 79 基本的三层包装系统 . 79 溢出清除程序 . 81 第五部分 生物技术介绍 第16章 生物安全和重组DNA技术 . 85 生物表达系统的生物安全考虑 . 85 表达载体的生物安全考虑 . 85 用于基因转移的病毒载体 . 85 转基因动物和“基因敲除”动物 . 86 转基因植物 . 86 遗传修饰生物体的危险度评估 . 86 进一步的考虑 . 87 第六部分 化学品、火和电的安全 第 17 章 危害性化学品 . 91 暴露途径 . 91 化学品的储存 . 91 关于不相容化学品的一般原则 . 91 化学品的毒性作用 . 91 爆炸性化学品 . 92 化学品溢出 . 92
实验室生物安全手册压缩气体和液化气92第18章其他实验室危害94火的危害94..电的危害95..噪声...95电离辐射95第七部分安全组织和培训第 19 章生物安全官员和安全委员会101*000...0.生物安全官员101生物安全委员会101第20章后勤保障人员的安全103工程和建筑物的维护保养103清洁（内务）保养103..第21章培训规划·104第八部分安全清单第22 章安全清单109实验室建筑109储存设施109环境卫生和工作人员设施.109暖气和通风110照明110保养110实验室生物安全保障·110防火与消防111111易燃液体的储存压缩气体和液化气111电的危害112个体防护112工作人员的健康与安全112实验室仪器设备113感染性物质113114化学品和放射性物质第九部分参考文献、附录和索引参考文献117vi
实验室生物安全手册 vi 压缩气体和液化气 . 92 第 18 章 其他实验室危害 . 94 火的危害 . 94 电的危害 . 95 噪声 . 95 电离辐射 . 95 第七部分 安全组织和培训 第 19 章 生物安全官员和安全委员会 . 101 生物安全官员 . 101 生物安全委员会 . 101 第 20 章 后勤保障人员的安全 . 103 工程和建筑物的维护保养 . 103 清洁（内务）保养 . 103 第 21 章 培训规划 . 104 第八部分 安全清单 第 22 章 安全清单 . 109 实验室建筑 . 109 储存设施 . 109 环境卫生和工作人员设施 . 109 暖气和通风 . 110 照明 . 110 保养 . 110 实验室生物安全保障. 110 防火与消防 . 111 易燃液体的储存 . 111 压缩气体和液化气 . 111 电的危害 . 112 个体防护 . 112 工作人员的健康与安全 . 112 实验室仪器设备 . 113 感染性物质 . 113 化学品和放射性物质 . 114 第九部分 参考文献、附录和索引 参考文献 . 117
目录附录1急救121122附录2工作人员的免疫接种·附录3WHO生物安全合作中心123附录4设备的安全性124二可能产生危害的仪器设备124附录5化学品：危害与预防127...索引·150vi
目录 vii 附录 1 急救 . 121 附录 2 工作人员的免疫接种. 122 附录 3 WHO 生物安全合作中心 . 123 附录 4 设备的安全性 . 124 可能产生危害的仪器设备 . 124 附录 5 化学品：危害与预防 . 127 索引 . 150
序世界卫生组织（WHO）早就认识到安全，特别是生物安全，是一个重要的国际性问题，因此早在1983年就出版了《实验室生物安全手册》（LaboratoryBiosafetyManual）第1版。该手册鼓励各国接受和执行生物安全的基本概念，并鼓励针对本国实验室如何安全处理致病微生物制订操作规范。1983年以来，已经有许多国家利用该手册所提供的专家指导，制订了生物安全操作规范。该手册的第2版于1993年出版。在该手册第3版中，WHO将继续发挥她在国际生物安全领域的领导作用，阐述新千年所面临的生物安全和生物安全保障问题。该手册第3版自始至终强调了工作人员个人责任心的重要作用，并在下列几个方面增加了新的内容：危险度评估、重组DNA技术的安全利用以及感染性物质运输。世界上最近发生的事件表明，由于蓄意滥用和排放微生物因子和毒素，公共卫生正受到新的威胁。因此，第3版也介绍了生物安全保障的概念一一保护微生物资源免受盗窃、遗失或转移，以免因微生物资源的不适当使用而危及公共卫生。第3版中还包括了1997年WHO出版的《卫生保健实验室安全》[（SafetyinHealth-CareLaboratories）中有关安全的内容。WHO《实验室生物安全手册》第3版对各个国家都是有益的参考和指南，它可以帮助制订并建立微生物学操作规范，确保微生物资源的安全，进而确保其可用于临床、研究和流行病学等各项工作。DrA.Asamoa-Baah助理总干事传染病事务世界卫生组织瑞士，日内瓦vili
viii 序 世界卫生组织（WHO）早就认识到安全，特别是生物安全，是一个重要的国际性问题，因 此早在 1983 年就出版了《实验室生物安全手册》（Laboratory Biosafety Manual）第 1 版。该手册 鼓励各国接受和执行生物安全的基本概念，并鼓励针对本国实验室如何安全处理致病微生物制订 操作规范。1983 年以来，已经有许多国家利用该手册所提供的专家指导，制订了生物安全操作规 范。该手册的第 2 版于 1993 年出版。 在该手册第 3 版中，WHO 将继续发挥她在国际生物安全领域的领导作用，阐述新千年所面 临的生物安全和生物安全保障问题。该手册第 3 版自始至终强调了工作人员个人责任心的重要作 用，并在下列几个方面增加了新的内容：危险度评估、重组 DNA 技术的安全利用以及感染性物 质运输。世界上最近发生的事件表明，由于蓄意滥用和排放微生物因子和毒素，公共卫生正受到 新的威胁。因此，第 3 版也介绍了生物安全保障的概念——保护微生物资源免受盗窃、遗失或转 移，以免因微生物资源的不适当使用而危及公共卫生。第 3 版中还包括了 1997 年 WHO 出版的 《卫生保健实验室安全》[1]（Safety in Health-Care Laboratories）中有关安全的内容。 WHO《实验室生物安全手册》第 3 版对各个国家都是有益的参考和指南，它可以帮助制订 并建立微生物学操作规范，确保微生物资源的安全，进而确保其可用于临床、研究和流行病学等 各项工作。 Dr A. Asamoa-Baah 助理总干事 传染病事务 世界卫生组织 瑞士，日内瓦
致谢《实验室生物安全手册》第3版的完成得益于下列人员的贡献，在此表示衷心的感谢：Dr W.Emmett Barkley, Howard Hughes Medical Institute, Chevy Chase, MD, USADr Murray L.Cohen, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA, USA(retired)Dr Ingegerd Kallings, Swedish Institute ofInfectious Disease Control, Stockholm, SwedenMsMaryEllenKennedy,Consultant in Biosafety,Ashton,Ontario,CanadaMs Margery Kennett, Victorian Infectious Diseases Reference Laboratory, North Melbourne,Australia(retired)Dr Richard Knudsen,Office of Health and Safety, Centers for Disease Control and Prevention,Atlanta, GA,USADr Nicoletta Previsani, Biosafety programme, World Health Organization, Geneva,SwitzerlandDr Jonathan Richmond, Office of Health and Safety,Centers for Disease Control andPrevention,Atlanta,GA,USA(retired)DrSyedA.Sattar,FacultyofMedicine,UniversityofOttawa,Ottawa,Ontario,CanadaDr Deborah E.Wilson,Division of Occupational Health and Safety,Officeof ResearchServices,National Institutes of Health,Department of Health and Human Services,Washington,DC,USADr Riccardo Wittek, Institute of Animal Biology, University of Lausanne, Lausanne,Switzerland并感谢下列人员所给予的协助：MsMaureenBest,Officeof LaboratorySecurity,HealthCanada,Otawa,CanadaDrMikeCatton,VictorianInfectiousDiseases ReferenceLaboratory,Melbourne,AustraliaDrShannaNesby,OfficeofHealthandSafety,CentersforDiseaseControl andPrevention,Atlanta,GA,USADr Stefan Wagener, Canadian Science Centre for Human and Animal Health, Winnipeg,Canada作者和审阅人还要感谢许多专业人员在《实验室生物安全手册》第1版和第2版以及1997年WHO出版的《卫生保健实验室安全》[中所做出的原创性贡献。ix
ix 致谢 《实验室生物安全手册》第 3 版的完成得益于下列人员的贡献，在此表示衷心的感谢： Dr W. Emmett Barkley, Howard Hughes Medical Institute, Chevy Chase, MD, USA Dr Murray L. Cohen, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA, USA （retired） Dr Ingegerd Kallings, Swedish Institute of Infectious Disease Control, Stockholm, Sweden Ms Mary Ellen Kennedy, Consultant in Biosafety, Ashton, Ontario, Canada Ms Margery Kennett, Victorian Infectious Diseases Reference Laboratory, North Melbourne, Australia （retired） Dr Richard Knudsen, Office of Health and Safety, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA, USA Dr Nicoletta Previsani, Biosafety programme, World Health Organization, Geneva, Switzerland Dr Jonathan Richmond, Office of Health and Safety, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA, USA （retired） Dr Syed A. Sattar, Faculty of Medicine, University of Ottawa, Ottawa, Ontario, Canada Dr Deborah E. Wilson, Division of Occupational Health and Safety, Office of Research Services, National Institutes of Health, Department of Health and Human Services, Washington, DC, USA Dr Riccardo Wittek, Institute of Animal Biology, University of Lausanne, Lausanne, Switzerland 并感谢下列人员所给予的协助： Ms Maureen Best, Office of Laboratory Security, Health Canada, Ottawa, Canada Dr Mike Catton, Victorian Infectious Diseases Reference Laboratory, Melbourne, Australia Dr Shanna Nesby, Office of Health and Safety, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA, USA Dr Stefan Wagener, Canadian Science Centre for Human and Animal Health, Winnipeg, Canada 作者和审阅人还要感谢许多专业人员在《实验室生物安全手册》第 1 版和第 2 版以及 1997 年 WHO 出版的《卫生保健实验室安全》[1]中所做出的原创性贡献