第四章单克隆杭保 各自表达其特有的细胞表面标志物，利用单克隆抗体的特异识别功能，可对它们进行识别和 分类。通讨单克降抗体鉴别并编号的人类白细胞分化抗原(cluster of differentiation,CD) 目前己近二百种。不同细胞亚群行使者不同的生理功能，为了对其功能机制进行研究，首先 需要讲行对不同亚群细胞分离纯化。常用方法是先将特异抗体标以荧光素（亦可将荧光素标 记在第二抗体上)，由于特异抗体同抗原的结合，使得表达该抗原的细胞在一定激发光下能 发出荧光，因而可用荧光流式细胞仪(fluorescence-activated cellsor,FACS)将其与其它 细胞分离。 (三)在细胞受体研究中的应用 受体在介导细胞信号传导、调节细胞生物学行为中起着极为重要的作用，但由于受体在 细胞总蛋白中所占比例极少，用一般理化方法难以纯化获得足量受体分子。由于单克降抗体 有同抗原特异结合的特性，它在受体的分离纯化、细胞定位、结构研究及功能分析中得到了 广泛的应用。如在对受体进行分离纯化时，可首先将相应的单克隆抗体作为配体直接连接于 固相载体上，以亲和层析方法对受体进行有效的分离与纯化。用亲和层析方法获得的受体在 一般情况下能保持良好的生物活性，用该法已纯化了乙酰胆碱、胰岛素、低密度脂蛋白等受 将受体单克隆抗体与酶或放射性核素、荧光素连接，通过底物显色，放射显影或荧光测 定可确定受体的细胞定位。如Mcc©llam等用过氧化物酶偶联的雌激素受体单抗与猴子宫内 膜作用，经染色可见着色颗粒分布于细胞核及胞浆内，提示该受体定位于胞核及胞浆。Kg 用样方法发现乳腺癌细胞核内有雌激素受体。 由于进化的原因，不同种属的同一受体在结构上可能不尽相同。利用单抗可以了解不同 种属同一受体的结构特异性。如识别牛雌激素受体的单抗不与人及其它哺乳动物雌激素受体 结合，说明牛雌澈素受体与其它哺乳动物的雌激素受体有结构上的差异。利用单克隆抗体也 可了解受体上抗原决定簇的数目和组成，有助于对受体亚单位结构的分析。如Chartmon等 用单克降抗体分析了牛子宫难激素受体的分子组成，发现每个天然的“85”受体分子有2个抗 原决定簇，当用高浓度盐处理后得到的4S后只有一个决定簇，提示受体是由“4S”组成的二 聚体。 将单克隆抗体标记荧光素可用于对生物活性分子的胞内示踪，以了解该分子的活性状 态。如核转录因子NFKB在非转录状态下位于胞浆，当受到多种因素刺激时可形成二聚体并 进入核内，调节相关基因的转录。因此，可以用抗NB的抗体通过对其在细胞内的定位了 解功能状态。又如调节细胞周期及凋亡相关的抑癌基因p53蛋白，正常状态下在细胞内的半 衰期极短，用常规方法难以检测，但当其发生突变后，正常功能消失并半衰期明显延长，引 起在细胞内的聚集，因此，用抗p53抗体检测细胞内p53聚集状况，可了解p53的功能状态。 上述仅反映了单克隆抗体在研究领域中应用的一个侧面，可以毫不夸张地说，单克隆抗体在 生命科学研究中的应用是其它任何制剂所不能取代的，其应用广泛性也是前所未有的，没有 单克隆抗体技术，不可能有今天生命科学研究的长足发展， 二、单克隆抗体在医学研究及疾病诊断、治疗中的应用 -72第四章 单克隆抗体 - 72 - 各自表达其特有的细胞表面标志物，利用单克隆抗体的特异识别功能，可对它们进行识别和 分类。通过单克隆抗体鉴别并编号的人类白细胞分化抗原（cluster of differentiation，CD） 目前已近二百种。不同细胞亚群行使着不同的生理功能，为了对其功能机制进行研究，首先 需要进行对不同亚群细胞分离纯化。常用方法是先将特异抗体标以荧光素（亦可将荧光素标 记在第二抗体上），由于特异抗体同抗原的结合，使得表达该抗原的细胞在一定激发光下能 发出荧光，因而可用荧光流式细胞仪（fluorescence-activated cell sorter，FACS）将其与其它 细胞分离。 （三）在细胞受体研究中的应用 受体在介导细胞信号传导、调节细胞生物学行为中起着极为重要的作用，但由于受体在 细胞总蛋白中所占比例极少，用一般理化方法难以纯化获得足量受体分子。由于单克隆抗体 有同抗原特异结合的特性，它在受体的分离纯化、细胞定位、结构研究及功能分析中得到了 广泛的应用。如在对受体进行分离纯化时，可首先将相应的单克隆抗体作为配体直接连接于 固相载体上，以亲和层析方法对受体进行有效的分离与纯化。用亲和层析方法获得的受体在 一般情况下能保持良好的生物活性，用该法已纯化了乙酰胆碱、胰岛素、低密度脂蛋白等受 体。 将受体单克隆抗体与酶或放射性核素、荧光素连接，通过底物显色，放射显影或荧光测 定可确定受体的细胞定位。如 Mccellam 等用过氧化物酶偶联的雌激素受体单抗与猴子宫内 膜作用，经染色可见着色颗粒分布于细胞核及胞浆内，提示该受体定位于胞核及胞浆。King 用样方法发现乳腺癌细胞核内有雌激素受体。 由于进化的原因，不同种属的同一受体在结构上可能不尽相同。利用单抗可以了解不同 种属同一受体的结构特异性。如识别牛雌激素受体的单抗不与人及其它哺乳动物雌激素受体 结合，说明牛雌激素受体与其它哺乳动物的雌激素受体有结构上的差异。利用单克隆抗体也 可了解受体上抗原决定簇的数目和组成，有助于对受体亚单位结构的分析。如 Chartmon 等 用单克隆抗体分析了牛子宫雌激素受体的分子组成，发现每个天然的“85”受体分子有 2 个抗 原决定簇，当用高浓度盐处理后得到的“4S”后只有一个决定簇，提示受体是由“4S”组成的二 聚体。 将单克隆抗体标记荧光素可用于对生物活性分子的胞内示踪，以了解该分子的活性状 态。如核转录因子 NFKB 在非转录状态下位于胞浆，当受到多种因素刺激时可形成二聚体并 进入核内，调节相关基因的转录。因此，可以用抗 NFKB 的抗体通过对其在细胞内的定位了 解功能状态。又如调节细胞周期及凋亡相关的抑癌基因 p53 蛋白，正常状态下在细胞内的半 衰期极短，用常规方法难以检测，但当其发生突变后，正常功能消失并半衰期明显延长，引 起在细胞内的聚集，因此，用抗 p53 抗体检测细胞内 p53 聚集状况，可了解 p53 的功能状态。 上述仅反映了单克隆抗体在研究领域中应用的一个侧面，可以毫不夸张地说，单克隆抗体在 生命科学研究中的应用是其它任何制剂所不能取代的，其应用广泛性也是前所未有的，没有 单克隆抗体技术，不可能有今天生命科学研究的长足发展。 二、单克隆抗体在医学研究及疾病诊断、治疗中的应用