106(总第147期 水利渔业 2006年第26卷5期 草鱼呼肠孤病毒的研究进展 肖雪,颜其贵,欧洋,曹洪志,樊汶樵,李冰,赖雏莉,张传,周磊,冯林,刘亚 (四川农业大学动物生技术中心四川安014) 摘要草国(CY)病毒科、水生呼肠孤病毒属的病毒中毒力最强的病毒,严重危 害着我国淡水渔业的养殖。基因由1朵A,编码11种结CC能够合成内源 性RA聚合酶在体外转录。总结了近20年来我国在CCRV形态结构理化特性、培养特性、分子生物学以 及预防治疗等方面的研究成果,提出了CCRV的重要酶类作为RNA干涉基因的思路。由于中和效价最高 的蛋白基因M6在毒中有相对保守性,初步确认了基因工程亚单位疫苗开发的可行性。 关键词草鱼出血病草鱼呼肠(r)rna 中414标码文-0 草鱼出血病是一种危害草鱼的高度传染性、致死性28℃,且能保持14五以上的稳定,因此病毒流行具有季节 的病毒性传病。1978年开始道种病的病原体是一性。病毒毒力的差与保存温度、时间有关。比较我国 种病毒并分离鉴定了毒株854的理化特性和生物学特学者分离并保存的具有感染性的草鱼出血病病毒 性1983年从草出血病中分离出一株草鱼出血病病毒C763毒在-30 利架迪度 孤病毒在世界范围内造成了极大的危害,不仅能引起淡上,比离CRY9经过34代的传代后 水鱼类的感染面且还能染海鱼现在已实200新到64 加坡大面积发生的马鲅鱼流行病是水生呼肠微病毒引m 起草鱼出血病病毒是我国分离鉴定的第一株鱼类病现在已实了CCRV具有的集人的“型红 毒现在已有资料证实是水生呼肠孤病毒属中致病力最细胞的能力,也能引起鸡红细胞高滴度凝集,而且这种凝 强的毒仅感染草鱼面可感青鱼,是鱼集能被特性抗血清抑制。 种培育阶段的最大病害1995年病毒分类命名委员会 3培养特 ,). 该病毒能在草鱼鳍条细胞(CF)、草鱼囊细胞系 1形态特征 901,、细施(CAB)、给胞系(CP-一 病毒形态结构与正呼肠病相似。病毒粒子为2080)中增殖,对BKkm等功物的细胞不敏感。 面体:32对称的球形颗粒直径为5~12m,CK细胞是该病毒最敏感的细胞系。不同的毒株对不同 直径约0m,无膜具有层壳壳,系敏性用K 上面有20个中空型的颗粒;内壳5.2m用a蛋白肥上(HM)细(CO上 消外壳后,可面有个物突起C管(CO0接种 c现内壳上只有个速出来 CRV9014和 圆柱形钉状物 GCRV873 ,GCRV83 CK, CAB. FHIK 2理化特 种细胞系中均未观察到细胞病变CCRV-V在盲传3 粒子30围定,下作用代后通过免反应能够检测到病毒粒子。我国分高的毒 3m对均不完整C9CHM系上增,面在 子密度梯心浮力密度1.上不能生长一样在物的 度1.0为5m细系上不能长。 病毒核心能合成RVA聚台酶,酶活性的最适温度是 4病毒组织性和病理变化 收期:005-2 通讯者其 病毒主要经鱼进人体,d后发病,57d后表现 省在出的出血症状死高感染后在舒胜 生主要从事病原分子生物学研究。 组织细胞内观察到大小约为50mm的毒,散布于细胞质 内,在肠组织细胞内观察到大小为70~78m的病毒粒·106- (总第 147期) 水 利 渔 业 2006年第26卷第5期 草鱼呼肠孤病毒的研究进展 肖 雪，颜其贵，欧 洋，曹洪志，樊汉樵，李 冰，赖维莉，张传斌，周 磊，冯 停，林 涛，刘 亚 (四川农业大学动物生物技术中心，四川雅安 625014) 摘要:草鱼呼肠孤病毒(GCRV)是呼肠孤病毒科、水生呼肠孤病毒属的病毒中毒力最强的病毒，严重危 害着我国淡水渔业的养殖。基因组由11条分节段dsRNA组成，编码11种结构多肤。GCRV能够合成内源 性RNA聚合酶，在体外转录。总结了近20年来我国在GCRV形态结构、理化特性、培养特性、分子生物学以 及预防治疗等方面的研究成果，提出了GCRV的重要酶类作为RNA干涉靶基因的思路。由于中和效价最高 的蛋白基因M6在毒株中具有相对保守性，初步确认了基因工程亚单位疫苗开发的可行性。 关健词:草鱼出血病;草鱼呼肠孤病毒(GCRV) ; dsRNA 中图分类号:5941.41 文献标识码;A 文章编号:1003一1278 (2006) 05 -0106 -04 草鱼出血病是一种危害草鱼的高度传染性、致死性 的病毒性传染病。1978年开始报道这种病的病原体是一 种病毒，并分离鉴定了毒株854的理化特性和生物学特 性。1983年从草鱼出血病中分离出一株草鱼出血病病毒 (Grass Carp Haemorrhage Virus, GCHV )，并鉴定为呼肠孤 病毒科，水生呼肠孤病毒属的一个新成员川。水生呼肠 孤病毒在世界范围内造成了极大的危害，不仅能引起淡 水鱼类的感染，而且还能感染海鱼，现在已证实2002年新 加坡大面积发生的马鱿鱼流行病是水生呼肠孤病毒引 起川。草鱼出血病病毒是我国分离鉴定的第一株鱼类病 毒，现在已有资料证实是水生呼肠孤病毒属中致病力最 强的毒株川，不仅感染草鱼，而且还可以感染青鱼，是鱼 种培育阶段的最大病害。1995年，病毒分类命名委员会 对该病毒正式命名为草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovi￾rus,GCRV )。 2890，且能保持14h以上的稳定，因此病毒流行具有季节 性。病毒毒力的差异与保存温度、时间有关。比较我国 学者分离并保存的具有感染性的草鱼出血病病毒 GCRV873,GCRV875 ,GCRV876，发现这3株病毒在 一3090 保存10年仍然能够感染草鱼肾细胞(CIK)，在病毒毒力 测定中，3种病毒感染细胞的滴度均在102TCID,/mL以 上，比新分离的GCRV991略低。经过3一4代的传代后， 其滴度均有所升高，GCRV873达到最高6.4 x 10"TCID50/ ML1s 1。 现在已证实了GCRV具有较弱的凝集人的“O"型红 细胞的能力，也能引起鸡红细胞高滴度凝集，而且这种凝 集能被特异性抗血清所抑制[6]。 1 形态特征 病毒形态结构与正呼肠孤病毒相似。病毒粒子为20 面体，5: 3. 2对称的球形颗粒，直径为65一72 rim，核心 直径约为50 nm，无囊膜，具有双层衣壳。外衣壳约9 n, 上面有20个中空型的颗粒;内衣壳5. 2 run，用 a糜蛋白 酶消化外衣壳后，可见内衣壳上面有 12个钉状物突起， 而对GCRV873精细结的研究中发现，内衣壳上只有6个 圆柱形钉状物川。 2 理化特性 病毒粒子在pH 3一10的范围内较稳定，56℃下作用 30 min仍具有感染性，对氯仿和乙醚均不敏感。完整的 病毒粒子在CSCI密度梯度离心的浮力密度为 1.37岁 cm3，蔗糖梯度离心则为1. 305 g/cm3，沉降系数为550Sa 病毒核心能合成 RNA聚合酶，酶活性的最适温度是 收稿日期:2005一12-20 通讯作者:颜其贵 作者简介:肖雪，1981年生，女，四川省雅安人，在读硕士研究 生，主要从事病原分子生物学研究。 3 培养特性 该病毒能在草鱼鳍条细胞(CF)、草鱼囊胚细胞系 (GCB)、草鱼性腺细胞(CO) , CIK、草鱼吻端细胞(ZC- 7901)、脚鱼囊胚培养细胞(CAB)、草鱼胚胎细胞系(CP- 80)等中增殖，对BHK, Vero等哺乳动物的细胞不敏感。 CIK细胞是该病毒最敏感的细胞系。不同的毒株对不同 细胞系的敏感性又有所差异。用6种细胞系:CIK, CAB , 肥头鲤上皮细胞 (FHM )、鱼卵巢细胞(GCO),鲤鱼的上 皮癌纸状细胞(EPC)和给鱼的输卵管细胞系(CCO)接种 从越南分离 出的毒株 GCRV一V, GCRV9014和 GCRV873E71 ,GCRV873能够引起CIK, CAB , FHM和GCO 典型的细胞病变，但GCRV一V和GCRV9014在感染的6 种细胞系中，均未观察到细胞病变。GCRV一V在盲传3 代后通过免疫反应能够检测到病毒粒子。我国分离的毒 株GCRV991能在CIK, FHM细胞系上很好地增殖，而在 EPC上不能生长，同其它毒株一样，在哺乳动物的BHK, Vero细胞系上不能生长。 4 病毒组织嗜性和病理变化 病毒主要经鱼鳃进人鱼体，4d后发病，5一7d后表现 出明显的出血症状，进人死亡高峰。人工感染后，在肾脏 组织细胞内观察到大小约为50nm的病毒，散布于细胞质 内，在肠组织细胞内观察到大小为 70一78nm的病毒粒