206年第卷第5 水利進业 (总第12.10 子形态与离心提纯的病毒粒子相同。因此,无外衣壳的片段的特征序列,因此又被错误包装进病毒衣壳形成缺 未成骢病毒存在于肾脏,成熟約病喜粒子是在肠道内。损型病毒願粒.。缺损型颗粒不编码功能性蛋白,能进行 各脏器約血管和微血管内皮细胞也可以观察到病毒。自我复制,但是这些小片段遇到了互补片断,就将g重组成 病毒破坏循环系统,使血管扩张,裰血作用减弱,血完整約病毒核酸,重新获得感染性,因此考虑到其安全性 清乳酸氢酶同工酶的相对活性紊乱,鱼体生理功能严问题失型颗粒-般作为研究病幸基因功能的工具 重失调进-步引发各器官的病变和功能的丧失。病毒53基因綸碉的蛋自 对肾班和肠道的直接作用进-步加剧了循环系统的破现在已经确认病毒粒子有1结构多我国学 坏。病毒对部分脏器(如肝脏)和免疫系统具有破坏力,者体5外翻泽c73基因组编吗了12条多欧,研究表 不是因为病聋的直接作用,而是病毒感染后产生的-些明,各基因组片段与编吗多狱的关系是大体一对应的, 可溶性因子以及血管损伤的进-步发展。 除89和S1:编码的多与病毒衣壳中的多联在分子 5GCRV分子生物学 量上无完全对应关系,1:编码2种多肽,推测是体外表 达的非成熟中间产物,需要进行修饰现在未见证实这 51GC基因组综构 准测約报道。S:0的翻译能力较弱外。根摇基因命名其 日前水生呼肠孤病毒属的病毒以RNM杂交为依据编码的蛋的为到Plw和WP0编码的是 可以分为7个亚型。水生呼肠孤病壽基因组具有以下共核心衣壳多肽,8、Y和Ⅶ编码的是外农壳多 同特征:RN3末端不有:(就某种病面言,耿。现在还不能完全确定报导的这些多为结构 各dRNM基因组片段5和3末端都享有相同的46个湫,但也没有排除它们有属于结构多狱的成分。 ψ的两端保守序列,紧连特异的倒转重复序列。病毒具5编吗结构蛋白V,该蛋白与的内衣壳结 有内源性BNA聚合酶,可以进行体外转录 构蛋白以相似。M6编码由68个氮基酸残基您成,分 CN基因组由2分段:组成,总分子量子量6.7KD的外衣壳蛋白。推测该蛋白拥有-4 为15460其中最的0580m,1-4蛋白水解位点,进人细胞后容易被水解掉,便与 最大的片段31由于病毒基因组是分节转录产物的释放,该位点与哺乳动物的m蛋白相似 段的,造成不同病李喜株的复杂性和高度可变性,根据1等)用Z载体表达8,得到由49个氨基酸残 基因片段在聚丙烯酰波凝胶上的迁移率,由慢到快,基因基组成,分子量为4D的内衣壳蛋白,该蛋白与嘈乳动 组片段按分子量分为3个组,分别命名为113-6、物的Sm2蛋白有密切的联系,对于该蛋白是内衣壳蛋 -1747入同,分子量有所03131还是外衣壳蛋白现在还没有定论。m c:N模型的究表明,每个片没都等时报道0编码:6氮基酸组成的外衣壳蛋白 具有(Gu8(的保序列推测其分子量30个锌指序列调节基因表 这些末端插人重复序列是相当保守的,被认为是病毒基达:该蛋白的類基酸序列与银大马哈鱼水生呼肠孤病喜 因组的一般特征。除10外每个片段只编码1种多肽。、:0条纹鲈呼肠孤病0以及哺乳类呼肠孤病毒斗相 52因组的转录和翻译 似的亲水序列,与其它呼肠孤病毒无明显同源性。 病毒基因组的转录分为早期转录和晚期转录。早期我国学者证实2具有RHA聚合酶活性,该酶在 转最是转录以病dM为模板晚期转录是以BM病毒中存在高度保守D结构。表现 子代病毒基因经为模板。CRw早期基因转录是从病毒帽化转录約BA和甲基转移酶的活性,但是缺失一般甲 感染细胞4后开始,C后获得晚期基因的转录产物,其基转移酶G保守区。W在鸟苷酸转移反应中,且 M的大小和数日大体上与病喜基因组8致。具60时表现出最大活性使-种组氨酸质子化这个 体过程是宿主细胞胞饮吞噬病毒粒子,胞内的溶菌酶消特点在已知的正呼孤病毒和水生呼肠孤病毒中具有保 化掉病毒一半的衣壳蛋白,成为多孔状态的亚病毒颗粒,守性3。具有MmPe及解旋酶活性,绑定邮 剩下約外衣壳在转录中保护反应核心,提高转录效率。M$编码的由32个基酸组成,分子量为3170 在亚病毒颗粒内,转录出的正链RNA通过颗粒上的孔释的非结构蛋白,与MV以及鸟类呼场孤病毒科(MRY的 放到细胞质中,许多新合成的mBN楼与应核心相连d8至蛋白有密切的联系王/等078研究 成环形结构是反应核心的典型特征:正链RA即可以是致的。该蛋白的二级结构含有41%a-螺旋和 泽成各种蛋白质,也可以作为半基因组装配人壳体中4.4-折叠片。对该蛋白的生化实验和免皮性分析折 成为前核。前核中的正链RNA才由病毒的聚台合酶加倍成还未见进-步的报道。部分基因片段不上含有一个起始 为妞RNA和衣壳蛋白组装成为新的病毒体 密码子,所以部分基因片断可能编码一种蛋白 我国学者研c83其因组转录时发现在病 毒基细外存在许多小分子量的RHA片段这些片段来 6cCN的免疫性 毒基因组转录时,原病毒基因组的剪切、重排,因GCRY与其它已知的鱼类呼肠孤病毒无交灵抗原不 此含原基因经某-片段3端和5端的保守区和倒转重同毒株之间也存在抗原性差异病毒结构蛋白W、 复区缺失中间部分。末端保守序列是病毒蛋白筛选WF,,W的抗血清具有中和燉价,6诱导的中和 NA进行包装的标志重复序列是该片段区别于其它抗体效价最高,极可能是主要的中和抗原。CRN低温下2006年第26卷第5期 水 利 渔 业 (总第147期) ·107 子，形态与离心提纯的病毒粒子相同。因此，无外衣壳的 未成熟病毒存在于肾脏，成熟的病毒粒子是在肠道内。 各脏器的血管和微血管内皮细胞也可以观察到病毒[al0 病毒破坏循环系统，使血管扩张，凝血作用减弱，血 清乳酸脱氢酶同工酶的相对活性紊乱，鱼体生理功能严 重失调，进一步引发各器官的病变和功能的丧失。病毒 对肾脏和肠道的直接作用进一步加剧了循环系统的破 坏。病毒对部分脏器(如肝脏)和免疫系统具有破坏力， 不是因为病毒的直接作用，而是病毒感染后产生的一些 可溶性因子以及血管损伤的进一步发展。 5 GCRV分子生物学 5.1 GCRV基因组结构 目前水生呼肠孤病毒属的病毒以RNA杂交为依据 可以分为7个亚型。水生呼肠孤病毒基因组具有以下共 同特征:RNA3’末端不具有Poly ( A)尾;就某种病毒而言， 各dsRNA基因组片段5‘和3‘末端都享有相同的4一6个 by的两端保守序列，紧连特异的倒转重复序列。病毒具 有内源性RNA聚合酶，可以进行体外转录。 GCRV基因组由11条分节段dsRNA组成，总分子量 为15.46 x 106 Dalton，其中最小的片段0.55 x 106Dalton, 最大的片段为3.1 x 106Dalton。由于病毒基因组是分节 段的，造成不同病毒毒株的复杂性和高度可变性。根据 基因片段在聚丙烯酞胺凝胶上的迁移率，由慢到快，基因 组片段按分子量分为3个组，分别命名为Ll一3,M4一6, S7一11。随毒株的不同，分子量有所差别(0.3x1护一3.1 x 106 Dalton) o GCRV873模型的研究表明，每个片段都 具有5' (GUUAUUU)和3'( UUCAUC)的保守序列[9-11]0 这些末端插人重复序列是相当保守的，被认为是病毒基 因组的一般特征。除Sll外，每个片段只编码 1种多肤。 5.2 基因组的转录和翻译 病毒基因组的转录分为早期转录和晚期转录。早期 转录是RNA转录酶以病毒dsRNA为模板;晚期转录是以 子代病毒基因组为模板。GCRV早期基因转录是从病毒 感染细胞4h后开始，10h后获得晚期基因的转录产物，其 mRNA的大小和数目大体上与病毒基因组相一致〔121。具 体过程是宿主细胞胞饮吞噬病毒粒子，胞内的溶菌酶消 化掉病毒一半的衣壳蛋白，成为多孔状态的亚病毒颗粒， 剩下的外衣壳在转录中保护反应核心，提高转录效率。 在亚病毒颗粒内，转录出的正链 RNA通过颗粒上的孔释 放到细胞质中，许多新合成的mRNA链与反应核心相连 成环形结构扩是反应核心的典型特征。正链RNA即可以 翻译成各种蛋白质，也可以作为半基因组装配人壳体中 成为前核。前核中的正链RNA才由病毒的聚合酶加倍成 为dsRNA和衣壳蛋白组装成为新的病毒体。 我国学者[13]研究GCRV873基因组转录时，发现在病 毒基因组外存在许多小分子量的RNA片段。这些片段来 源于病毒基因组转录时，原病毒基因组的剪切、重排，因 此富含原基因组某一片段3‘端和5'端的保守区和倒转重 复区，缺失中间部分。末端保守序列是病毒蛋白筛选 dsRNA进行包装的标志，重复序列是该片段区别于其它 片段的特征序列，因此又被错误包装进病毒衣壳形成缺 损型病毒颗粒。缺损型颗粒不编码功能性蛋白，能进行 自我复制，但是这些小片段遇到了互补片断，就将重组成 完整的病毒核酸，重新获得感染性，因此考虑到其安全性 问题，缺失型颗粒一般作为研究病毒基因功能的工具。 5.3 基因编码的蛋白 现在已经确认病毒粒子有 11种结构多肤。我国学 者体外翻译GCRV873基因组编码了12条多肤，研究表 明，各基因组片段与编码多肤的关系是大体一一对应的， 除S8,S9和Sll编码的多肤与病毒衣壳中的多肤在分子 量上无完全对应关系，S11编码2种多肤，推测是体外表 达的非成熟中间产物，需要进行修饰，现在未见证实这一 推测的报道。S10的翻译能力较弱外。根据基因命名其 编码的蛋白为 Vpl到Vpl o VP1一5和 Vp10编码的是 核心衣壳多肤,VP8,VP9,VP6和VP7编码的是外衣壳多 肤〔’心1。现在还不能完全确定报导的这些多肤为结构多 肤，但也没有排除它们有属于结构多肤的成分。 M5编码结构蛋白VP5，该蛋白与MRV的内衣壳结 构蛋白衅相似。M6编码由648个氨基酸残基组成，分 子量68. 7KD的外衣壳蛋白。推测该蛋白拥有Asn -42 - Pro一43蛋白水解位点，进人细胞后容易被水解掉，便与 转录产物的释放，该位点与哺乳动物的 mul蛋白相似。 Qiu T等〔141用pET载体表达S8，得到由409个氨基酸残 基组成，分子量为44KD的内衣壳蛋白，该蛋白与哺乳动 物的Sigma2蛋白有密切的联系。对于该蛋白是内衣壳蛋 白，还是外衣壳蛋白现在还没有定论[15,16] o Tao Qiu 等〔11]报道S10编码由276个氨基酸组成的外衣壳蛋白， 推测其分子量约为29. 7 KD，含 1个锌指序列调节基因表 达。该蛋白的氨基酸序列与银大马哈鱼水生呼肠孤病毒 S10、条纹妒呼肠孤病毒 S10以及哺乳类呼肠孤病毒S4相 似的亲水序列，与其它呼肠孤病毒无明显同源性。 我国学者证实VP2具有 RNA聚合酶活性，该酶 在 RNA病毒中存在高度保守的GDD结构域〔’?〕。VPl表现 帽化转录的RNA和甲基转移酶的活性，但是缺失一般甲 基转移酶KxDG保守区。VP1在鸟昔酸转移反应中，且 pH <- 6. 0时表现出最大活性，使一种组氨酸质子化，这个 特点在已知的正呼肠孤病毒和水生呼肠孤病毒中具有保 守性[18-20]。0VP3具有NTPase及解旋酶活性，绑定dsR￾NAo S9编码的由352个氨基酸组成，分子量为 37. 7KD 的非结构蛋白，与MRV以及鸟类呼肠孤病毒科(MRV)的 QNS蛋白有密切的联系，与王炜等[21〕对GCRV873的研究 是一致的。该蛋白的二级结构含有40.1%。一螺旋和 49.4%0一折叠片。对该蛋白的生化实验和免疫性分析 还未见进一步的报道。部分基因片段不止含有一个起始 密码子，所以部分基因片断可能编码一种蛋白。 6 GCRV的免疫性 GCRV与其它已知的鱼类呼肠孤病毒无交叉抗原，不 同毒株之间也存在抗原性差异。病毒结构蛋白VPl, VP5, VP6 , VP9的抗血清具有中和效价，VP6诱导的中和 抗体效价最高，极可能是主要的中和抗原。GCRV低温下