性DNA转移到硝酸纤维素膜上（硝酸纤维素膜只吸附变性DNA!),在8OC烤4~6h,使 DNA牢固地吸在纤维素膜上。然后与放射性同位素标记的变性后的DNA,探针进行杂交。 杂交须在较高的盐浓度及适当的温度（一般为68℃）下进行数小时或十余小时，然后通过 洗涤除去未杂交上的标记物。将纤维素膜烘干后进行放射自显影。 除了DNA外，RNA也可用作探针(Prob)。用P标记核酸时（用作探针），可以在 3'或5'末端标记，也可采用均匀标记。 应用类似的方法也可分析RNA,即将RNA变性后转移到纤维素膜上再进行杂交。这 种方法称为Northern印迹法(Northern blotting)。用类似的方法，根据抗体与抗原可以结 合的原理，也可以分析蛋白质。这个方法称为Westem印迹法(Western blotting)。 应用核酸杂交技术，可以将含量极少的真核细胞基因组中的单拷贝基因钓出来。 五、核酸的分离 I.RNA的分离 RNA的分离方法因材料及所要分离的RNA种类而异。目前最普遍使用的是酚提取法， 将组织购浆用苯酚处理并离心，RNA即溶解于上层被苯酚饱和的水层中，而DNA和己被 凝固的蛋白质分布在下层为水饱和的苯酚中。将上清液吸出，加入乙醇，RNA即呈白色絮 状沉淀析出。 2.DNA的分离 DNA的提取法也有多种。目前一般是根据DNA核蛋白能溶于水及高浓度(I~2mol /L)NaCI溶液，而难溶于0.14mdl/L的NaCI,RNA核蛋白则易溶于0.14mol/L的NaCI 溶液这一原理进行分离。可先用O.14mol/L的NaC溶液除去组织中的RNA核蛋白，然 后用十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)处理，使DNA与蛋白质分离，并用 浓(1mol/L)NaCI溶液溶解DNA,再用氯仿一异戊醇将蛋白质沉淀除去，最后向DNA 溶液中加入乙醇，DNA即呈丝状物沉淀析出。 第四节病毒和核蛋白 一。病毒 病毒是由具有侵染性的核酸和蛋白质组成的。病毒是介于生物和非生物之间，它们虽 然含有核酸和蛋白质两种生物大分子，但它们本身不能进行繁殖，只有当侵入寄主细胞内 后，才能利用寄主细胞的系统而进行繁殖。但病毒和其他生物一样，也具有繁殖、遗传 变异等生命现象。病毒能使动物和植物发生多种疾病：人类的疾病，如狂犬病、天花、肝 炎、流行性感冒等，病毒也能引起恶性肿瘤：植物的病害，如烟草花叶病、番茄矮丛病、 水稻矮缩病、小麦黄矮病等：病毒还能侵染细菌，侵染细菌的病毒称为噬菌体。 -94 －94－ 性 DNA 转移到硝酸纤维素膜上（硝酸纤维素膜只吸附变性DNA！），在 80℃烤 4～6h，使 DNA 牢固地吸在纤维素膜上。然后与放射性同位素标记的变性后的DNA，探针进行杂交。 杂交须在较高的盐浓度及适当的温度（一般为 68℃）下进行数小时或十余小时，然后通过 洗涤除去未杂交上的标记物。将纤维素膜烘干后进行放射自显影。 除了 DNA 外，RNA 也可用作探针（Probe）。用 32P 标记核酸时（用作探针），可以在 3′或 5′末端标记，也可采用均匀标记。 应用类似的方法也可分析 RNA，即将 RNA 变性后转移到纤维素膜上再进行杂交。这 种方法称为 Northern 印迹法（Northern blotting）。用类似的方法，根据抗体与抗原可以结 合的原理，也可以分析蛋白质。这个方法称为 Western 印迹法（Western blotting）。 应用核酸杂交技术，可以将含量极少的真核细胞基因组中的单拷贝基因钓出来。 五、核酸的分离 1． RNA 的分离 RNA 的分离方法因材料及所要分离的 RNA 种类而异。目前最普遍使用的是酚提取法。 将组织匀浆用苯酚处理并离心，RNA 即溶解于上层被苯酚饱和的水层中，而 DNA和已被 凝固的蛋白质分布在下层为水饱和的苯酚中。将上清液吸出，加入乙醇，RNA 即呈白色絮 状沉淀析出。 2．DNA 的分离 DNA 的提取法也有多种。目前一般是根据 DNA 核蛋白能溶于水及高浓度(1～2 mol ／L)NaCl 溶液，而难溶于 0.14 mol／L 的 NaCl，RNA 核蛋白则易溶于 0.14 mol／L 的 NaCl 溶液这一原理进行分离。可先用 0.14 mol／L 的 NaCl 溶液除去组织中的 RNA 核蛋白，然 后用十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate，SDS）处理，使 DNA 与蛋白质分离，并用 浓（1 mol／L）NaCl 溶液溶解 DNA，再用氯仿—异戊醇将蛋白质沉淀除去，最后向 DNA 溶液中加入乙醇，DNA 即呈丝状物沉淀析出。 第四节 病毒和核蛋白 一．病毒 病毒是由具有侵染性的核酸和蛋白质组成的。病毒是介于生物和非生物之间，它们虽 然含有核酸和蛋白质两种生物大分子，但它们本身不能进行繁殖，只有当侵入寄主细胞内 后，才能利用寄主细胞的系统而进行繁殖。但病毒和其他生物一样，也具有繁殖、遗传、 变异等生命现象。病毒能使动物和植物发生多种疾病：人类的疾病，如狂犬病、天花、肝 炎、流行性感冒等，病毒也能引起恶性肿瘤；植物的病害，如烟草花叶病、番茄矮丛病、 水稻矮缩病、小麦黄矮病等；病毒还能侵染细菌，侵染细菌的病毒称为噬菌体