(1)DNA的均一性均一性愈高的样品，熔解过程愈是发生在一个很小的温度范围 内。 (2)G一C之含量GC含量越高，Tm值越高，成正比关系，如图4-15。这是G 一C对比A一T对更为稳定的缘故。所以测定Tm值可推算出G一C对的含量。其经验公式 为： G-C(%)=(Tm-69.3)×2.44 1.61 1.4100% Poly d(A-T) DNA Poly d(G-C) 40 .00 60T.807.T。100 0L9 80 90 100 图4-15DNM的Tm值与G-C含量关系 。草分 图4-l4某些DNA的Tm值 3。大 4。色结 (3)介质中的离子强度一般说来，在离子强度较低的介质中，DNA的熔解温度较低， 熔解温度的范围也较窄。而在较高的离子强度的介质中，情况则相反。所以DNA制品应 保存在较高浓度的缓冲液中或溶液中，故常在1mol/L的NaC1中保存。 RNA分子中有局部的双螺旋区，所以RNA也可发生变性，但Tm值较低，变性曲线也 不那么陡。 变性DNA在适当条件下，又可使两条彼此分开的链重新合成为双螺旅结构，这二 过程称为复性。DNA复性后，许多物理化学性质又得到恢复，生物活性也可以得到部分恢 复。 将不同来源的DNA放在试管里，经热变性后，慢慢冷却，让其复性，若这些异源DNA 之间在某些区域有相同的序列，则复性时，会形成杂交DNA分子。DNA与互补的RNA 之间也可以发生杂交。核酸的杂交在分子生物学和分子遗传学的研究中应用极广，许多重 大的分子遗传学问题都是用分子杂交来解决的。 核酸杂交可以在液相或固相上进行。目前实验室中应用最广的是用硝酸纤维素膜作支 持物进行的杂交。英国的分子生物学家E.M.Southern所发明的Southern印迹法(Sonthern blotting)就是将凝胶上的DNA片段转移到硝酸纤维素膜上后，再进行杂交的。这里以 DNA-DNA杂交为例，较详细地介绍Southern印迹法。将DNA样品经限制性内切酶降解 后，用琼脂糖凝胶电泳进行分离。将胶浸泡在碱(NaOH)中使DNA进行变性，然后将变 -93－93－ （１）DNA 的均一性 均一性愈高的样品，熔解过程愈是发生在一个很小的温度范围 内。 （２）G—C 之含量 G—C 含量越高，Tm值越高，成正比关系，如图 4-15。这是 G —C 对比 A—-T 对更为稳定的缘故。所以测定Tm值可推算出 G—C 对的含量。其经验公式 为： G—C（％）＝（Tm－69.3）×2.44 （３）介质中的离子强度一般说来，在离子强度较低的介质中，DNA 的熔解温度较低， 熔解温度的范围也较窄。而在较高的离子强度的介质中，情况则相反。所以 DNA 制品应 保存在较高浓度的缓冲液中或溶液中，故常在 1 mol／L 的 NaCl 中保存。 RNA 分子中有局部的双螺旋区，所以 RNA 也可发生变性，但Tm值较低，变性曲线也 不那么陡。 变性 DNA 在适当条件下，又可使两条彼此分开的链重新缔合成为双螺旋结构，这一 过程称为复性。DNA复性后，许多物理化学性质又得到恢复，生物活性也可以得到部分恢 复。 将不同来源的 DNA放在试管里，经热变性后，慢慢冷却，让其复性，若这些异源 DNA 之间在某些区域有相同的序列，则复性时，会形成杂交 DNA 分子。DNA 与互补的 RNA 之间也可以发生杂交。核酸的杂交在分子生物学和分子遗传学的研究中应用极广，许多重 大的分子遗传学问题都是用分子杂交来解决的。 核酸杂交可以在液相或固相上进行。目前实验室中应用最广的是用硝酸纤维素膜作支 持物进行的杂交。英国的分子生物学家 E. M .Southern 所发明的 Southern 印迹法（Sonthern blotting）就是将凝胶上的 DNA 片段转移到硝酸纤维素膜上后，再进行杂交的。这里以 DNA-DNA 杂交为例，较详细地介绍 Southern 印迹法。将 DNA 样品经限制性内切酶降解 后，用琼脂糖凝胶电泳进行分离。将胶浸泡在碱（NaOH）中使 DNA 进行变性，然后将变 图 4-14 某些 DNA 的 Tm 值 图 4-15 DNA 的 Tm值与 G-C 含量关系 DNA 来源：1。草分枝杆菌; 2。沙门氏杆菌; 3。大肠 杆菌; 4。鲑鱼精子；5。小牛胸腺；6。肺炎球菌；7。 酵母；8 噬菌体 T6 ；9。多聚 d(A—T)