分光光度计读出260nm与280nm的OD值，从 OD20/OD20的值即可判断样品的比纯度。纯 DNA的OD20/OD20应为1.8，纯RNA的应为 2.0。样品中如含有杂蛋白及苯酚，OD20/OD2s0 的值即明显降低。不纯的样品不能用紫外吸收法 作定时测定。对于纯的样品，只要读出260mm的 OD值即可算出含量。通常按1OD值相当于50 μg/ml双螺旋DNA,或40μg/ml单螺旋DNA (或RNA),或2μg/ml寡核苷酸计算。这个方 法既快速又准确，而且不会浪费样品。对于不纯 的核酸可以用琼脂糖凝胶电泳分离出区带后，经 啡啶溴红染色而粗略地估计其含量。图412为 DNA的紫外吸收光谱。 220240260280nm 四、核酸的变性、复性和分子杂交 被长 1、核酸的变性、复性 高温、酸、藏拟及某些变性剂（如尿素）能破核酸中的氢毽，使之断裂核酸中的 双螺旋区变成单魅，并不涉及共价健的断裂，这 一过程称为核酸的变性。 图412DNA的紫外吸收光谐 当将DNA的稀盐溶液加热到80~IO0C时， 1.天然DNM:2.变性DN:3,核苷酸总吸收 双螺旋结构即发生解体，两条链分开，形成无规 线团（如图413），一系列理化性质也随之发生改变：260m区紫外吸收值升高，粘度降 低，浮力密度升高，同时改变二级结构，有时可以失去部分或全部生物活性。DNA的变性 的特点是爆发式的，变性作用发生在一个很窄的温度范围内。 双螺旋DNA 部分解徒DNA DNA分开成无规则线团 链内碱某配刻 图4I3DNA的变性过程 通常把DNA的双螺旋结构失去一半时的温度称为该DNA的格点或焙解温度(melting temperature),用Tm表示。DNA的Tm值一般在70~85℃之间。如图414。 DNA的Tm值大小与下列因素有关： -92 －92－ 分光光度计读出 260 nm 与 280 nm 的 OD 值，从 OD260／OD280 的值即可判断样品的比纯度。纯 DNA 的 OD260／OD280 应为 1.8，纯 RNA 的应为 2.0。样品中如含有杂蛋白及苯酚，OD260／OD280 的值即明显降低。不纯的样品不能用紫外吸收法 作定时测定。对于纯的样品，只要读出 260nm 的 OD 值即可算出含量。通常按 1OD 值相当于 50 μg／ml 双螺旋DNA，或 40μg／ml 单螺旋 DNA （或 RNA），或 2μg／ml 寡核苷酸计算。这个方 法既快速又准确，而且不会浪费样品。对于不纯 的核酸可以用琼脂糖凝胶电泳分离出区带后，经 啡啶溴红染色而粗略地估计其含量。图 4-12 为 DNA 的紫外吸收光谱。 四、核酸的变性、复性和分子杂交 1、核酸的变性、复性 高温、酸、碱以及某些变性剂（如尿素）能破坏核酸中的氢键，使之断裂，核酸中的 双螺旋区变成单链，并不涉及共价键的断裂，这 一过程称为核酸的变性。 当将 DNA 的稀盐溶液加热到80～l00℃时， 双螺旋结构即发生解体，两条链分开，形成无规 线团（如图 4-13）, 一系列理化性质也随之发生改变：260 nm 区紫外吸收值升高，粘度降 低，浮力密度升高，同时改变二级结构，有时可以失去部分或全部生物活性。DNA的变性 的特点是爆发式的，变性作用发生在一个很窄的温度范围内。 图 4-13 DNA 的变性过程 通常把 DNA的双螺旋结构失去一半时的温度称为该 DNA的熔点或熔解温度（melting temperature），用 Tm表示。DNA 的 Tm值一般在 70～85℃之间。如图 4-14。 DNA 的 Tm值大小与下列因素有关： 图 4-12 DNA 的紫外吸收光谱 1.天然 DNA；2.变性 DNA；3.核苷酸总吸收