常规石蜡切片制作 石蜡制片技术是利用石蜡的硬度,以石蜡包埋组织,制成切片的病理实验技术。是病理实验技术的核心内容, 常规染色、特殊染色、酶组织化学显示、免疫组织化学染色及原位杂交技术等都离不开制片技术。病理教学、科 硏、临床活检、尸体剖验等都是建立在石蜡组织制片和常规染色的基础上,它也是组织学、胚胎学、生物学、动物 学等科学研究观察组织细胞形态结构变化的主要方法。石蜡切片制作的主要过程有:取材→固定→洗涤→脱水→透 明→浸腊→包埋→切片→染色→封固。一般需约24h。利用全自动脱水机和包埋机可实现石蜡切片的自动化、程序 化操作,大大提高制片效率 (一)洗涤 洗涤是组织固定后把渗入组织中的固定液洗去,以利于脱水及透明,并防止染色中福尔马林色素产生。 1.一般洗涤法一般常规固定液(10%福尔马林液)可用流水冲洗,冲洗时间基本根据固定时间长短而定,尸检 组织、大动物组织冲洗时间为24h左右,小动物组织冲洗为2-10h 2.特殊洗涤法固定液为乙醇或乙醇混合液固定者,一般不要求冲洗,如需冲洗必须用与固定液中的乙醇浓度相 近的乙醇冲洗,不可用水或浓度相差很大的乙醇冲洗。含有苦味酸固定的组织,可用50%或70%乙醇浸洗。用氯化汞 固定的组织常有一种结晶状或不规则块状沉淀物生成,该物必须洗掉,否则会使组织发脆,或染色不良。脱汞的方 法是:用0.5%碘酒溶液(70%乙醇配制)逐渐反复加入70%乙醇中,直至加入的碘呈黄色为止,最后用硫代硫酸钠洗 去,或用70%乙醇洗去碘 (二)脱水 脱水就是利用脱水剂置换及完全除去组织内的水分,以利于透明及浸蜡。由于脱水剂穿透组织的速度很快,可 以使组织再次发生一定的硬化变脆及过度收缩,因此必须从低浓度开始,依次递增,直至纯脱水剂,最后组织内水 分为高浓度脱水剂所取代,故也称为梯度脱水 常用的脱水剂有 乙醇( alcohol,酒精)是制片最常用的试剂,可与水在仼何比例下相混合,乙醇的脱水能力比较强,又能 硬化组织,但容易使组织收缩及硬化变脆(尤其是高浓度乙醇)。因此在以乙醇作为脱水剂时,应该先从浓度较低 的乙醇开始,然后递增其浓度,这样可以避免组织过度收缩。大多数组织标本可以从70%乙醇开始,再经80%, 95%以至无水乙醇。对一些经水溶性固定剂固定的柔软组织如眼球,胚胎组织、神经组织等需要慢慢脱水,从 50%乙醇开始。有时为了某种特殊要求,如要做糖原的切片标本或是要做尿酸结晶染色切片标本,为防止糖原和尿 酸结晶在水中消失却要直接投入无水乙醇中固定,而不需要经过水洗和低浓度乙醇的脱水过程。一般情况下,组织 经过70%,80%,90%,95%,以至无水乙醇的脱水程序,即可达到脱水的要求。但是为了能使大量的组织块同时 进行脱水,则要求保持液体的浓度以保证脱水的作用,最好是以两次95%乙醇,两次100%乙醇重复进行脱水,以 保证组织的水分脱净。脱水时间应视组织种类,组织块大小,厚薄和固定剂的不同而异。如脱钙的骨组织,实质性 脏器等的脱水过程宜短,而疏松结缔组织,脂肪组织等,脱水过程则宜适当延长 乙醇脱水的基本原则:从低浓度开始逐渐升到高浓度,以保持组织中的水分完全脱净。一般1cmX1cmX0.2cm大 小的组织,脱水全过程仅需要数小时即可完成。在各级浓度乙醇内处理的最短时间分别减少到2一4h也能获得满意的 结果。如果组织脱水不尽,随后的透明、浸蜡都会受到影响,致使切片很难完成。外检标本的制作,目前都采用快 速脱水的方法。科研标本、教学标本的脱水时间比较长,其目的在于更充分脱水,并适当加强了组织的硬度 2.丙酮( Acetone)可用作固定液,也是一种比较好的脱水剂,可配制不同浓度进行脱水。脱水作用比乙醇强 速度快,但容易使组织过度硬化,所以应适当掌握脱水时间。丙酮价格较高,一般情况下,多用在无水酒精的补充 脱水或快速脱水,一般组织脱水少用。 3.叔丁醇( tertiary Buty alcohol)无毒,可与水、乙醇、二甲苯等混合,而且也能溶解石蜡,因此叔丁醇不仅可 以替代乙醇使组织脱水,还可以代替二甲苯使组织透明。平常在稀释时都与乙醇按照一定比例配制使用或单用,优常规石蜡切片制作 石蜡制片技术是利用石蜡的硬度，以石蜡包埋组织，制成切片的病理实验技术。是病理实验技术的核心内容， 常规染色、特殊染色、酶组织化学显示、免疫组织化学染色及原位杂交技术等都离不开制片技术。病理教学、科 研、临床活检、尸体剖验等都是建立在石蜡组织制片和常规染色的基础上，它也是组织学、胚胎学、生物学、动物 学等科学研究观察组织细胞形态结构变化的主要方法。石蜡切片制作的主要过程有：取材→固定→洗涤→脱水→透 明→浸腊→包埋→切片→染色→封固。一般需约24h。利用全自动脱水机和包埋机可实现石蜡切片的自动化、程序 化操作，大大提高制片效率。  （一） 洗涤 洗涤是组织固定后把渗入组织中的固定液洗去，以利于脱水及透明，并防止染色中福尔马林色素产生。  1.一般洗涤法一般常规固定液（10%福尔马林液）可用流水冲洗，冲洗时间基本根据固定时间长短而定，尸检 组织、大动物组织冲洗时间为24h左右，小动物组织冲洗为2-10h。  2.特殊洗涤法固定液为乙醇或乙醇混合液固定者，一般不要求冲洗，如需冲洗必须用与固定液中的乙醇浓度相 近的乙醇冲洗，不可用水或浓度相差很大的乙醇冲洗。含有苦味酸固定的组织，可用50%或70%乙醇浸洗。用氯化汞 固定的组织常有一种结晶状或不规则块状沉淀物生成，该物必须洗掉，否则会使组织发脆，或染色不良。脱汞的方 法是：用0.5%碘酒溶液（70%乙醇配制）逐渐反复加入70%乙醇中，直至加入的碘呈黄色为止，最后用硫代硫酸钠洗 去，或用70%乙醇洗去碘。  （二） 脱水 脱水就是利用脱水剂置换及完全除去组织内的水分，以利于透明及浸蜡。由于脱水剂穿透组织的速度很快，可 以使组织再次发生一定的硬化变脆及过度收缩，因此必须从低浓度开始，依次递增，直至纯脱水剂，最后组织内水 分为高浓度脱水剂所取代，故也称为梯度脱水。  常用的脱水剂有:  1.乙醇（alcohol，酒精） 是制片最常用的试剂，可与水在任何比例下相混合，乙醇的脱水能力比较强，又能 硬化组织，但容易使组织收缩及硬化变脆（尤其是高浓度乙醇）。因此在以乙醇作为脱水剂时，应该先从浓度较低 的乙醇开始，然后递增其浓度，这样可以避免组织过度收缩。大多数组织标本可以从70％乙醇开始，再经80％， 95％以至无水乙醇。 对一些经水溶性固定剂固定的柔软组织如眼球，胚胎组织、神经组织等需要慢慢脱水，从 50％乙醇开始。有时为了某种特殊要求，如要做糖原的切片标本或是要做尿酸结晶染色切片标本，为防止糖原和尿 酸结晶在水中消失却要直接投入无水乙醇中固定，而不需要经过水洗和低浓度乙醇的脱水过程。一般情况下，组织 经过70％，80％，90％，95％，以至无水乙醇的脱水程序，即可达到脱水的要求。但是为了能使大量的组织块同时 进行脱水，则要求保持液体的浓度以保证脱水的作用，最好是以两次95％乙醇，两次100％乙醇重复进行脱水，以 保证组织的水分脱净。脱水时间应视组织种类，组织块大小，厚薄和固定剂的不同而异。如脱钙的骨组织，实质性 脏器等的脱水过程宜短，而疏松结缔组织，脂肪组织等，脱水过程则宜适当延长。  乙醇脱水的基本原则：从低浓度开始逐渐升到高浓度，以保持组织中的水分完全脱净。一般1cmX1cmX0.2cm大 小的组织,脱水全过程仅需要数小时即可完成。在各级浓度乙醇内处理的最短时间分别减少到2—4h也能获得满意的 结果。如果组织脱水不尽，随后的透明、浸蜡都会受到影响，致使切片很难完成。外检标本的制作，目前都采用快 速脱水的方法。科研标本、教学标本的脱水时间比较长，其目的在于更充分脱水，并适当加强了组织的硬度。  2.丙酮(Acetone)可用作固定液，也是一种比较好的脱水剂，可配制不同浓度进行脱水。脱水作用比乙醇强、 速度快,但容易使组织过度硬化，所以应适当掌握脱水时间。丙酮价格较高，一般情况下，多用在无水酒精的补充 脱水或快速脱水，一般组织脱水少用。  3.叔丁醇(tertiary Buty alcohol)无毒,可与水、乙醇、二甲苯等混合,而且也能溶解石蜡,因此叔丁醇不仅可 以替代乙醇使组织脱水,还可以代替二甲苯使组织透明。平常在稀释时都与乙醇按照一定比例配制使用或单用,优于