常规石蜡切片制作 石蜡制片技术是利用石蜡的硬度,以石蜡包埋组织,制成切片的病理实验技术。是病理实验技术的核心内容, 常规染色、特殊染色、酶组织化学显示、免疫组织化学染色及原位杂交技术等都离不开制片技术。病理教学、科 硏、临床活检、尸体剖验等都是建立在石蜡组织制片和常规染色的基础上,它也是组织学、胚胎学、生物学、动物 学等科学研究观察组织细胞形态结构变化的主要方法。石蜡切片制作的主要过程有:取材→固定→洗涤→脱水→透 明→浸腊→包埋→切片→染色→封固。一般需约24h。利用全自动脱水机和包埋机可实现石蜡切片的自动化、程序 化操作,大大提高制片效率 (一)洗涤 洗涤是组织固定后把渗入组织中的固定液洗去,以利于脱水及透明,并防止染色中福尔马林色素产生。 1.一般洗涤法一般常规固定液(10%福尔马林液)可用流水冲洗,冲洗时间基本根据固定时间长短而定,尸检 组织、大动物组织冲洗时间为24h左右,小动物组织冲洗为2-10h 2.特殊洗涤法固定液为乙醇或乙醇混合液固定者,一般不要求冲洗,如需冲洗必须用与固定液中的乙醇浓度相 近的乙醇冲洗,不可用水或浓度相差很大的乙醇冲洗。含有苦味酸固定的组织,可用50%或70%乙醇浸洗。用氯化汞 固定的组织常有一种结晶状或不规则块状沉淀物生成,该物必须洗掉,否则会使组织发脆,或染色不良。脱汞的方 法是:用0.5%碘酒溶液(70%乙醇配制)逐渐反复加入70%乙醇中,直至加入的碘呈黄色为止,最后用硫代硫酸钠洗 去,或用70%乙醇洗去碘 (二)脱水 脱水就是利用脱水剂置换及完全除去组织内的水分,以利于透明及浸蜡。由于脱水剂穿透组织的速度很快,可 以使组织再次发生一定的硬化变脆及过度收缩,因此必须从低浓度开始,依次递增,直至纯脱水剂,最后组织内水 分为高浓度脱水剂所取代,故也称为梯度脱水 常用的脱水剂有 乙醇( alcohol,酒精)是制片最常用的试剂,可与水在仼何比例下相混合,乙醇的脱水能力比较强,又能 硬化组织,但容易使组织收缩及硬化变脆(尤其是高浓度乙醇)。因此在以乙醇作为脱水剂时,应该先从浓度较低 的乙醇开始,然后递增其浓度,这样可以避免组织过度收缩。大多数组织标本可以从70%乙醇开始,再经80%, 95%以至无水乙醇。对一些经水溶性固定剂固定的柔软组织如眼球,胚胎组织、神经组织等需要慢慢脱水,从 50%乙醇开始。有时为了某种特殊要求,如要做糖原的切片标本或是要做尿酸结晶染色切片标本,为防止糖原和尿 酸结晶在水中消失却要直接投入无水乙醇中固定,而不需要经过水洗和低浓度乙醇的脱水过程。一般情况下,组织 经过70%,80%,90%,95%,以至无水乙醇的脱水程序,即可达到脱水的要求。但是为了能使大量的组织块同时 进行脱水,则要求保持液体的浓度以保证脱水的作用,最好是以两次95%乙醇,两次100%乙醇重复进行脱水,以 保证组织的水分脱净。脱水时间应视组织种类,组织块大小,厚薄和固定剂的不同而异。如脱钙的骨组织,实质性 脏器等的脱水过程宜短,而疏松结缔组织,脂肪组织等,脱水过程则宜适当延长 乙醇脱水的基本原则:从低浓度开始逐渐升到高浓度,以保持组织中的水分完全脱净。一般1cmX1cmX0.2cm大 小的组织,脱水全过程仅需要数小时即可完成。在各级浓度乙醇内处理的最短时间分别减少到2一4h也能获得满意的 结果。如果组织脱水不尽,随后的透明、浸蜡都会受到影响,致使切片很难完成。外检标本的制作,目前都采用快 速脱水的方法。科研标本、教学标本的脱水时间比较长,其目的在于更充分脱水,并适当加强了组织的硬度 2.丙酮( Acetone)可用作固定液,也是一种比较好的脱水剂,可配制不同浓度进行脱水。脱水作用比乙醇强 速度快,但容易使组织过度硬化,所以应适当掌握脱水时间。丙酮价格较高,一般情况下,多用在无水酒精的补充 脱水或快速脱水,一般组织脱水少用。 3.叔丁醇( tertiary Buty alcohol)无毒,可与水、乙醇、二甲苯等混合,而且也能溶解石蜡,因此叔丁醇不仅可 以替代乙醇使组织脱水,还可以代替二甲苯使组织透明。平常在稀释时都与乙醇按照一定比例配制使用或单用,优
常规石蜡切片制作 石蜡制片技术是利用石蜡的硬度，以石蜡包埋组织，制成切片的病理实验技术。是病理实验技术的核心内容， 常规染色、特殊染色、酶组织化学显示、免疫组织化学染色及原位杂交技术等都离不开制片技术。病理教学、科 研、临床活检、尸体剖验等都是建立在石蜡组织制片和常规染色的基础上，它也是组织学、胚胎学、生物学、动物 学等科学研究观察组织细胞形态结构变化的主要方法。石蜡切片制作的主要过程有：取材→固定→洗涤→脱水→透 明→浸腊→包埋→切片→染色→封固。一般需约24h。利用全自动脱水机和包埋机可实现石蜡切片的自动化、程序 化操作，大大提高制片效率。 （一） 洗涤 洗涤是组织固定后把渗入组织中的固定液洗去，以利于脱水及透明，并防止染色中福尔马林色素产生。 1.一般洗涤法一般常规固定液（10%福尔马林液）可用流水冲洗，冲洗时间基本根据固定时间长短而定，尸检 组织、大动物组织冲洗时间为24h左右，小动物组织冲洗为2-10h。 2.特殊洗涤法固定液为乙醇或乙醇混合液固定者，一般不要求冲洗，如需冲洗必须用与固定液中的乙醇浓度相 近的乙醇冲洗，不可用水或浓度相差很大的乙醇冲洗。含有苦味酸固定的组织，可用50%或70%乙醇浸洗。用氯化汞 固定的组织常有一种结晶状或不规则块状沉淀物生成，该物必须洗掉，否则会使组织发脆，或染色不良。脱汞的方 法是：用0.5%碘酒溶液（70%乙醇配制）逐渐反复加入70%乙醇中，直至加入的碘呈黄色为止，最后用硫代硫酸钠洗 去，或用70%乙醇洗去碘。 （二） 脱水 脱水就是利用脱水剂置换及完全除去组织内的水分，以利于透明及浸蜡。由于脱水剂穿透组织的速度很快，可 以使组织再次发生一定的硬化变脆及过度收缩，因此必须从低浓度开始，依次递增，直至纯脱水剂，最后组织内水 分为高浓度脱水剂所取代，故也称为梯度脱水。 常用的脱水剂有: 1.乙醇（alcohol，酒精） 是制片最常用的试剂，可与水在任何比例下相混合，乙醇的脱水能力比较强，又能 硬化组织，但容易使组织收缩及硬化变脆（尤其是高浓度乙醇）。因此在以乙醇作为脱水剂时，应该先从浓度较低 的乙醇开始，然后递增其浓度，这样可以避免组织过度收缩。大多数组织标本可以从70％乙醇开始，再经80％， 95％以至无水乙醇。 对一些经水溶性固定剂固定的柔软组织如眼球，胚胎组织、神经组织等需要慢慢脱水，从 50％乙醇开始。有时为了某种特殊要求，如要做糖原的切片标本或是要做尿酸结晶染色切片标本，为防止糖原和尿 酸结晶在水中消失却要直接投入无水乙醇中固定，而不需要经过水洗和低浓度乙醇的脱水过程。一般情况下，组织 经过70％，80％，90％，95％，以至无水乙醇的脱水程序，即可达到脱水的要求。但是为了能使大量的组织块同时 进行脱水，则要求保持液体的浓度以保证脱水的作用，最好是以两次95％乙醇，两次100％乙醇重复进行脱水，以 保证组织的水分脱净。脱水时间应视组织种类，组织块大小，厚薄和固定剂的不同而异。如脱钙的骨组织，实质性 脏器等的脱水过程宜短，而疏松结缔组织，脂肪组织等，脱水过程则宜适当延长。 乙醇脱水的基本原则：从低浓度开始逐渐升到高浓度，以保持组织中的水分完全脱净。一般1cmX1cmX0.2cm大 小的组织,脱水全过程仅需要数小时即可完成。在各级浓度乙醇内处理的最短时间分别减少到2—4h也能获得满意的 结果。如果组织脱水不尽，随后的透明、浸蜡都会受到影响，致使切片很难完成。外检标本的制作，目前都采用快 速脱水的方法。科研标本、教学标本的脱水时间比较长，其目的在于更充分脱水，并适当加强了组织的硬度。 2.丙酮(Acetone)可用作固定液，也是一种比较好的脱水剂，可配制不同浓度进行脱水。脱水作用比乙醇强、 速度快,但容易使组织过度硬化，所以应适当掌握脱水时间。丙酮价格较高，一般情况下，多用在无水酒精的补充 脱水或快速脱水，一般组织脱水少用。 3.叔丁醇(tertiary Buty alcohol)无毒,可与水、乙醇、二甲苯等混合,而且也能溶解石蜡,因此叔丁醇不仅可 以替代乙醇使组织脱水,还可以代替二甲苯使组织透明。平常在稀释时都与乙醇按照一定比例配制使用或单用,优于
正丁醇,不会使组织收缩和变硬,不必经过透明剂直接浸蜡。 (三)透明 脱水后组织中水分被透明剂所代替称透明。常用的脱水剂如乙醇等不能溶解石蜡与之相混合,因此在浸蜡之前 必须使用一种既可以同乙醇又能同石蜡相混合的媒剂,以便使石蜡渗入到组织中去,当组织中全部为媒剂取代时, 光线可以透过,组织呈现不同程度的透明状态,此现象就称透明,所用媒剂为透明剂。实质上透明仅是一种过程而 非目的,其所以出现透明现象是因其折光系数改变的缘故。组织一旦呈现透明状态,说明脱水剂已被媒剂所取代 就可以将组织浸入溶解的石蜡进行浸蜡。透明剂很多,常用的有:二甲苯,苯,甲苯,氯仿,香桕油等 1.二甲苯( xylene)是最为常用的一种透明剂,易挥发、无色透亮液体,长期接触对呼吸道黏膜有刺激作 用,它能与乙醇,丙酮相混合,又是石蜡的溶剂。在透明过程中,能使组织发生硬化、收缩、变脆,且作用迅速 因此,组织在二甲苯中时间不宜过长,一般是达到组织的透明为止,一般需0.5-1h 2.甲苯( toluene)性质同二甲苯,优点是对组织块收缩较小,但透明较慢,一般需60h左右,也易变脆。有时 用以代替二甲苯 3.苯( benzene)与二甲苯相似,它较甲苯和二甲苯的作用稍缓,对组织收缩较少,不易变脆,一般需60h左 右,但苯较二甲苯毒性大,挥发快,易燃,吸入能引起中毒,故应注意安全使用。 4.氯仿( chloroform)即三氯甲烷。也是一种很好的透明剂,它的作用缓和,透明能力比二甲苯、苯差,透明时 间12-24h,组织在此液内不易变硬变脆,这一点较苯,二甲苯和甲苯优良。但氯仿比重较大,折光率较小,组织在 氯仿中不易呈现二甲苯那样的透明现象,所以组织要比实际需要浸渍更长一些时间保证完全渗透和置换出酒精。 5.To型生物制片透明剂是近年来针对二甲苯挥发性大,对人体有害而研制的一种替代透明剂,认为I0的优点是 无毒,对组织软硬适中,收缩性小,制片后染色效果好。 透明时间的长短因组织的大小而异。例如脑组织和有血块的组织,应缩短在二甲苯内留置时间,而一些肌肉组 织和胃肠组织则应该稍延长在二甲苯内留置时间,最好先投入乙醇和透明剂等量混合液半小时,再入透明剂,并更 换一次透明剂,待组织完全透明后进行浸蜡,一般需要0.5h至2-3h。脂肪组织由于其结构不同透明最快,但是这 并不能说明组织中脱水剂已完全被透明剂取代,因脂肪组织本身折光率与透明剂(二甲苯)相近,所以应在透明剂 中多浸一段时间使脂肪组织尽可能为透明剂所溶解,才有利于石蜡的侵入。 (四)浸腊 组织经透明后,移入熔化的石蜡内浸渍,石蜡逐渐浸λ组织间隙,取代透明剂,这一过程叫浸蜡。其目的是以 石蜡置换出组织中的二甲苯,使较软的组织块变成有一定硬度的组织蜡块,以便切成薄片。浸蜡的方法是将组织块 经过二甲苯透明后,立即投入到溶化的石蜡中去,浸蜡时组织必须经过数次纯石蜡(石蜡1、2、3),使剩余透明 剂完全去除 石蜡根据熔点不同分软蜡和硬蜡,软蜡熔点低,硬蜡熔点高,一般切片所有软蜡的熔点为42-45℃,45 50℃,硬蜡熔点为52-54℃,56-60℃,现在也有62一64℃的硬蜡。使用时应根据组织类型以及制片时的温度和气 候而异。夏季采用高熔点的石蜡,冬季则采用低熔点的石蜡。组织较硬时,用硬蜡,反之,用软蜡。浸蜡需要能 够保持于54-60℃温箱内进行,一般箱内温度略高于石蜡解点2-3℃即可。 组织浸蜡时间也应视组织种类大小和结构不同而异,基本上与组织固定时间成正比。也要考虑组织的种类, 骨、皮肤和中枢神经系统等致密组织要比软组织如肝肾等需要加倍时间;含血多的组织,肌肉和纤维束在蜡内易过 硬而发脆,故浸蜡时间应缩短:疏松组织,脂眆,消化道组织等浸蜡时间可以适当延长一些。为了尽可能排除透明 剂,浸蜡可以分两级或三级进行。以熔点较低的软石蜡作为第一步(石蜡1),然后再换为熔点较高的石蜡作为第 二步(石蜡2),第三步(石蜡3)。浸蜡时间1一4h,或更长 五)包埋
正丁醇，不会使组织收缩和变硬，不必经过透明剂直接浸蜡。 (三)透明 脱水后组织中水分被透明剂所代替称透明。常用的脱水剂如乙醇等不能溶解石蜡与之相混合，因此在浸蜡之前 必须使用一种既可以同乙醇又能同石蜡相混合的媒剂，以便使石蜡渗入到组织中去，当组织中全部为媒剂取代时， 光线可以透过，组织呈现不同程度的透明状态，此现象就称透明，所用媒剂为透明剂。实质上透明仅是一种过程而 非目的，其所以出现透明现象是因其折光系数改变的缘故。组织一旦呈现透明状态，说明脱水剂已被媒剂所取代， 就可以将组织浸入溶解的石蜡进行浸蜡。透明剂很多，常用的有：二甲苯，苯，甲苯，氯仿，香柏油等。 1.二甲苯（xylene） 是最为常用的一种透明剂，易挥发、无色透亮液体，长期接触对呼吸道黏膜有刺激作 用，它能与乙醇，丙酮相混合，又是石蜡的溶剂。在透明过程中，能使组织发生硬化、收缩、变脆，且作用迅速， 因此，组织在二甲苯中时间不宜过长，一般是达到组织的透明为止，一般需0.5-1h。 2.甲苯（toluene）性质同二甲苯，优点是对组织块收缩较小，但透明较慢，一般需60h左右，也易变脆。有时 用以代替二甲苯。 3.苯（benzene） 与二甲苯相似，它较甲苯和二甲苯的作用稍缓，对组织收缩较少，不易变脆，一般需60h左 右，但苯较二甲苯毒性大，挥发快，易燃，吸入能引起中毒，故应注意安全使用。 4.氯仿(chlorofoem)即三氯甲烷。也是一种很好的透明剂，它的作用缓和，透明能力比二甲苯、苯差，透明时 间12-24h，组织在此液内不易变硬变脆，这一点较苯，二甲苯和甲苯优良。但氯仿比重较大，折光率较小，组织在 氯仿中不易呈现二甲苯那样的透明现象，所以组织要比实际需要浸渍更长一些时间保证完全渗透和置换出酒精。 5.TO型生物制片透明剂是近年来针对二甲苯挥发性大，对人体有害而研制的一种替代透明剂，认为TO的优点是 无毒，对组织软硬适中，收缩性小，制片后染色效果好。 透明时间的长短因组织的大小而异。例如脑组织和有血块的组织，应缩短在二甲苯内留置时间，而一些肌肉组 织和胃肠组织则应该稍延长在二甲苯内留置时间，最好先投入乙醇和透明剂等量混合液半小时，再入透明剂，并更 换一次透明剂，待组织完全透明后进行浸蜡，一般需要0.5h至2-3h。 脂肪组织由于其结构不同透明最快，但是这 并不能说明组织中脱水剂已完全被透明剂取代，因脂肪组织本身折光率与透明剂（二甲苯）相近，所以应在透明剂 中多浸一段时间使脂肪组织尽可能为透明剂所溶解，才有利于石蜡的侵入。 （四）浸腊 组织经透明后，移入熔化的石蜡内浸渍，石蜡逐渐浸入组织间隙，取代透明剂，这一过程叫浸蜡。其目的是以 石蜡置换出组织中的二甲苯，使较软的组织块变成有一定硬度的组织蜡块，以便切成薄片。浸蜡的方法是将组织块 经过二甲苯透明后，立即投入到溶化的石蜡中去，浸蜡时组织必须经过数次纯石蜡（石蜡1、2、3），使剩余透明 剂完全去除。 石蜡根据熔点不同分软蜡和硬蜡，软蜡熔点低，硬蜡熔点高，一般切片所有软蜡的熔点为42－45℃，45－ 50℃，硬蜡熔点为52－54℃，56－60℃，现在也有62－64℃的硬蜡。使用时应根据组织类型以及制片时的温度和气 候而异。夏季采用高熔点的石蜡，冬季则采用低熔点的石蜡。 组织较硬时，用硬蜡，反之，用软蜡。浸蜡需要能 够保持于54－60℃温箱内进行，一般箱内温度略高于石蜡解点2－3℃即可。 组织浸蜡时间也应视组织种类大小和结构不同而异，基本上与组织固定时间成正比。也要考虑组织的种类， 骨、皮肤和中枢神经系统等致密组织要比软组织如肝肾等需要加倍时间；含血多的组织，肌肉和纤维束在蜡内易过 硬而发脆，故浸蜡时间应缩短；疏松组织，脂肪，消化道组织等浸蜡时间可以适当延长一些。为了尽可能排除透明 剂，浸蜡可以分两级或三级进行。以熔点较低的软石蜡作为第一步（石蜡1），然后再换为熔点较高的石蜡作为第 二步（石蜡2），第三步(石蜡3)。浸蜡时间1－4h，或更长。 （五）包埋
包埋是组织经过固定、脱水、透明、浸蜡后,再用石蜡铸成蜡块的过程。包埋用的石蜡温度要稍高于浸蜡的温 度。石蜡包埋法是制作光学显微镜切片的常规方法,它有许多优点,操作简易便于掌握,可进行连续切片,包埋后 的组织可以长期保存 1.石蜡包埋方法先准备好一次性塑料包埋盒(或L型金属包埋框和包埋底板)、冷凝用的水缸、酒精灯、镊子 等,将熔蜡倾入一次性塑料包埋盒(或L型金属包埋框和包埋底板)内,迅速用加温镊子镊取组织块平放λ包埋框 底部,一般切面朝下置入框底并轻轻压平,待石蜡表面凝固前将标签贴于其上,需注意勿使标签与标本混淆,当蜡 块冷至蜡面有一层透明蜡膜时,浸λ冷水中迅速使其冷却均匀凝固,否则蜡内常形成结晶致切片破碎。待石蜡块完 全凝固变硬后,除去金属包埋框,取岀蜡块,修切边缘部多余的石蜡,准备制成切片或储藏备用 2.石蜡包埋的注意事项 1)包埋组织使用的石蜡不仅由于气候的不同需要加以选择,而且与组织的硬度也有密切关系,过硬的组织最 好用硬度较高的石蜡包埋,反之,软组织则应以硬度较低的石蜡包埋。其熔点一般要求在60℃左右。 (②)包埋用石蜡加温不可过高,以保持其不凝固为度,温度过高容易将组织烫坏,使得组织变硬、变脆,并发 生卷曲,收缩变形而不利于切片,甚至影响诊断。另外注意埋蜡的温度和组织本身的温度,两者是否合适,温度不 致常可造成组织与周围石蜡脱裂的现象,而达不到包埋的作用。 (3)包埋应注意组织病变面放在下面,并尽可能使组织放平,在不损伤组织的情况下可用镊子轻压:管状、囊 壁、皮肤及消化道等组织应竖埋,不要卷曲:相同组织如包埋于一个蜡块时,除包平外,还要注意方向的一致:;多 块组织和碎组织包埋于一个蜡块内时,组织的排列一定要密挤靠拢,以求成直线或方块行,这样有利于切片 (4)石蜡包埋后,不宜冷凝过慢,特别是室温较高时,石蜡凝固后应立即投入冷水中,加速冷却可增加石蜡密 度、韧性和硬度。但冷凝过速也会因为内外温差过大造成蜡块裂损。 3.常规石蜡切片组织处理程序 (1)组织取材2m厚度,固定于福尔马林数小时后再换以新鲜福尔马林固定数小时。 2)组织流水冲洗6-12h (3)70%乙醇2-4h (4)85%乙醇2-4h (5)95%乙醇(I)2-4h (6)95%乙醇(Ⅱ)1-2h (7)100%乙醇(I)1-2h (8)100%乙醇(Ⅱ)12h (9)二甲苯(I)0.5-1h (10)二甲苯(Ⅱ)1h左右。 (11)浸蜡(I)1-2h (12)浸蜡(Ⅱ)2-4h (13)组织包埋。 (六)切片
包埋是组织经过固定、脱水、透明、浸蜡后，再用石蜡铸成蜡块的过程。包埋用的石蜡温度要稍高于浸蜡的温 度。石蜡包埋法是制作光学显微镜切片的常规方法，它有许多优点，操作简易便于掌握，可进行连续切片，包埋后 的组织可以长期保存。 1.石蜡包埋方法先准备好一次性塑料包埋盒（或L型金属包埋框和包埋底板）、冷凝用的水缸、酒精灯、镊子 等，将熔蜡倾入一次性塑料包埋盒（或L型金属包埋框和包埋底板）内，迅速用加温镊子镊取组织块平放入包埋框 底部，一般切面朝下置入框底并轻轻压平，待石蜡表面凝固前将标签贴于其上，需注意勿使标签与标本混淆，当蜡 块冷至蜡面有一层透明蜡膜时，浸入冷水中迅速使其冷却均匀凝固，否则蜡内常形成结晶致切片破碎。待石蜡块完 全凝固变硬后，除去金属包埋框，取出蜡块，修切边缘部多余的石蜡，准备制成切片或储藏备用。 2.石蜡包埋的注意事项 (1)包埋组织使用的石蜡不仅由于气候的不同需要加以选择，而且与组织的硬度也有密切关系，过硬的组织最 好用硬度较高的石蜡包埋，反之，软组织则应以硬度较低的石蜡包埋。其熔点一般要求在60℃左右。 (2)包埋用石蜡加温不可过高，以保持其不凝固为度，温度过高容易将组织烫坏，使得组织变硬、变脆，并发 生卷曲，收缩变形而不利于切片，甚至影响诊断。另外注意埋蜡的温度和组织本身的温度，两者是否合适，温度不 一致常可造成组织与周围石蜡脱裂的现象，而达不到包埋的作用。 (3)包埋应注意组织病变面放在下面，并尽可能使组织放平，在不损伤组织的情况下可用镊子轻压； 管状、囊 壁、皮肤及消化道等组织应竖埋，不要卷曲；相同组织如包埋于一个蜡块时，除包平外，还要注意方向的一致；多 块组织和碎组织包埋于一个蜡块内时，组织的排列一定要密挤靠拢，以求成直线或方块行，这样有利于切片。 (4)石蜡包埋后，不宜冷凝过慢，特别是室温较高时，石蜡凝固后应立即投入冷水中，加速冷却可增加石蜡密 度、韧性和硬度。但冷凝过速也会因为内外温差过大造成蜡块裂损。 3.常规石蜡切片组织处理程序 (1)组织取材2mm厚度，固定于福尔马林数小时后再换以新鲜福尔马林固定数小时。 (2)组织流水冲洗6－12h。 (3)70％乙醇2-4h。 (4)85％乙醇2-4h。 (5)95％乙醇（Ⅰ）2-4h。 (6)95％乙醇（Ⅱ）1-2h。 (7)100％乙醇（Ⅰ）1-2h。 (8)100％乙醇（Ⅱ）1-2h。 (9)二甲苯（Ⅰ）0.5-1h。 (10)二甲苯（Ⅱ）1h左右。 (11)浸蜡（Ⅰ）1-2h。 (12)浸蜡（Ⅱ）2-4h。 （13） 组织包埋。 （六）切片
优良的切片技术取决于所有器械的透彻了解和丰富的实践经验,实验工作的每一方面都需熟练的技巧,这只有 靠实践才能获得。经良好训练和实践的技术工作者能在很短时间内制出第一流的切片。 1.切片机切片机是切制薄而均匀组织片的机械,组织用坚硬的石蜡支持,每切一次借切片厚度器自动向前(向 刀的方向)推进所需距离,厚度器的梯度通常为1μm。切片机的基本类型按结构分五种:①摇动式切片机,②轮转 式切片机,③滑动式切片机,④推动式(雪橇式)切片机,⑤冰冻切片机。最常用的是轮转式切片机。 轮转式切片机:系借转动手摇轮进行切片动作。通常用于石蜡切片,该机用途广,可连续切片,使用方便 速度快,切片刀是固定的,目前使用一次性刀片,不需磨刀。轮转式切片机是靠旋转一个重轮,带动螺纹轴或齿 轮,将组织夹具向前推进,并在上下平面摆动,推动的距离靠一个有刻度的调节器控制。夹具(安装组织固定台) 每上下摆动一次,即向前推进此调节器,可控制组织块按需要的调节刻度(μm)。调节切片厚度的装置刻有1-25 或1-40等数字,每个数字代表一个μm,可根据需要随意调节。 2.石蜡切片操作将预先冷却的组织蜡块装在切片机固定器上的夹座内,注意蜡块组织切面与切片刀口要垂直平 行。根据需要调整切片厚度标尺,一般4-6μm,摇动切片机手轮先进行修整切片,修出组织切面后,再进行切制 实践中可用右手均匀转动切片机手轮,左手用毛笔托起蜡片,协调地进行切片操作,切下的切片带,一端用镊子轻 轻拉起,尽可能将切片带拉直展开,用毛笔将切片带从刀口向上挑起,拉下切片带,然后轻拖铺于展片箱(40℃左 右热水)水面上。待切片充分摊开展平后,手持清洗好的以涂有蛋白甘油面的载玻片之一端,投向水中去附贴切 片,待切片被接引附贴于载玻片上后,再移至玻片上的1/2处,如组织较小,可在玻片上多贴几片或几排,但排列 应密集、整齐,用铅笔在玻片一端的毛玻璃上写上标本编号,字要写得小而清楚、端正。切片附贴后,放在空气中 稍晾干,即可进行烤片(60℃的温箱中烤30-60min)。血块组织、皮肤组织须及时烤片,但对脑组织及较大组织待 完全晾干后,才能进行烤片。 3.切片的注意事项 (1)切片质量的好坏,除与技术熟练程度和切片机的好坏有关外,切片刀是决定的因素,所以刀一定要十分锋 利,否则在切片时会自行卷起或皱起,或将组织划伤出现刀痕,更不能将切片切成连续地长条带状。切片刀如有缺 口存在,将使制成的切片断裂、破碎,不完整。 ()切片机的各个零件和螺丝应旋紧,否则将会产生震动。在每次更换蜡块时,应习惯地检査一下组织块是否 夹紧,切片刀是否稳固,稍有疏忽就会影响切片质量,甚至将蜡块全部切坏,造成不可弥补的后果 (3)在摇动切片机时,用力要求均匀一致,不宜过重过猛,否则可因用力过重而使机身震动,造成切片厚薄不 均。遇有硬化过度的脑、肝、脾等组织时,更应该轻轻切削,以防组织由于震动形成空洞现象。 (4)石蜡过软或室温过高,切片易粘与切片刀上,应使用冰块冷却,这样不仅可保持石蜡的硬度,同时也减少 切片的褶皱。反之,石蜡过硬或室温过低,可在蜡块切面上哈气加温
优良的切片技术取决于所有器械的透彻了解和丰富的实践经验,实验工作的每一方面都需熟练的技巧，这只有 靠实践才能获得。经良好训练和实践的技术工作者能在很短时间内制出第一流的切片。 1.切片机切片机是切制薄而均匀组织片的机械，组织用坚硬的石蜡支持，每切一次借切片厚度器自动向前（向 刀的方向）推进所需距离，厚度器的梯度通常为1μm。切片机的基本类型按结构分五种：①摇动式切片机，②轮转 式切片机，③滑动式切片机，④推动式（雪橇式）切片机，⑤冰冻切片机。最常用的是轮转式切片机。 轮转式切片机：系借转动手摇轮进行切片动作。 通常用于石蜡切片，该机用途广，可连续切片，使用方便， 速度快，切片刀是固定的，目前使用一次性刀片，不需磨刀。轮转式切片机是靠旋转一个重轮，带动螺纹轴或齿 轮，将组织夹具向前推进，并在上下平面摆动，推动的距离靠一个有刻度的调节器控制。夹具（安装组织固定台） 每上下摆动一次，即向前推进此调节器，可控制组织块按需要的调节刻度（μm）。调节切片厚度的装置刻有1-25 或1-40等数字，每个数字代表一个μm，可根据需要随意调节。 2.石蜡切片操作将预先冷却的组织蜡块装在切片机固定器上的夹座内，注意蜡块组织切面与切片刀口要垂直平 行。根据需要调整切片厚度标尺，一般4-6μm，摇动切片机手轮先进行修整切片，修出组织切面后，再进行切制。 实践中可用右手均匀转动切片机手轮，左手用毛笔托起蜡片，协调地进行切片操作，切下的切片带，一端用镊子轻 轻拉起，尽可能将切片带拉直展开，用毛笔将切片带从刀口向上挑起，拉下切片带，然后轻拖铺于展片箱（40℃左 右热水）水面上。待切片充分摊开展平后，手持清洗好的以涂有蛋白甘油面的载玻片之一端，投向水中去附贴切 片，待切片被接引附贴于载玻片上后，再移至玻片上的1/2处，如组织较小，可在玻片上多贴几片或几排，但排列 应密集、整齐，用铅笔在玻片一端的毛玻璃上写上标本编号，字要写得小而清楚、端正。切片附贴后，放在空气中 稍晾干，即可进行烤片（60℃的温箱中烤30-60min）。血块组织、皮肤组织须及时烤片，但对脑组织及较大组织待 完全晾干后，才能进行烤片。 3.切片的注意事项 (1)切片质量的好坏，除与技术熟练程度和切片机的好坏有关外，切片刀是决定的因素，所以刀一定要十分锋 利，否则在切片时会自行卷起或皱起，或将组织划伤出现刀痕，更不能将切片切成连续地长条带状。切片刀如有缺 口存在，将使制成的切片断裂、破碎，不完整。 (2)切片机的各个零件和螺丝应旋紧，否则将会产生震动。在每次更换蜡块时，应习惯地检查一下组织块是否 夹紧，切片刀是否稳固，稍有疏忽就会影响切片质量，甚至将蜡块全部切坏，造成不可弥补的后果。 (3)在摇动切片机时，用力要求均匀一致，不宜过重过猛，否则可因用力过重而使机身震动，造成切片厚薄不 均。遇有硬化过度的脑、肝、脾等组织时，更应该轻轻切削，以防组织由于震动形成空洞现象。 (4)石蜡过软或室温过高，切片易粘与切片刀上，应使用冰块冷却，这样不仅可保持石蜡的硬度，同时也减少 切片的褶皱。反之，石蜡过硬或室温过低，可在蜡块切面上哈气加温