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(4)液体稀释管法: 这与用于细菌活菌记数中的系列稀释法相似。不同的是:各试管中均加有培 养液(活菌记数只用无菌水,但用培养液是让活菌继续生长):各试管中均需接 种入处于对数期的寄主细胞(让噬菌体侵染):以不长菌的最高稀释管来测定效 价(不长菌说明全部被噬菌体裂解) (5)玻片快速法: 将噬菌体和敏感寄主细胞与适量的含0.5%-0.8%的琼脂培养基泥合,涂布在 无菌载玻片上,短期培养后在显微镜或放大镜下记数。此法速度快但精确度差 每种噬菌体的噬菌斑有一定的大小、形状、边缘特征和透明度,可用来做菌 种鉴定。噬菌斑也不仅仅是用于噬菌体的分离和记数,也用于噬菌体的检出和鉴 定。 3.一步生长曲线 描述烈性噬菌体生长规律的曲线。先将噬南体与敏感细菌混合(比例为1: 10)发生吸附,未吸附的噬菌体以离心法或加抗血清除去:然后定时取样接种在 有可裂解的敏感性细菌的平板上,经培养,计数光亮、透明的空斑一噬菌班。以 时间为横座标,噬菌斑数为纵座标绘图,所得曲线即为一步生长曲线。这一过程 分为几个时期: (1)潜伏期:从噬菌体核酸进入寄主细胞到底一个成熟粒子装配前。这是正 在进行核酸和蛋白质的合成,尚未装配。这时我们看到培养皿上的现象是噬菌斑 数目不增加。潜伏期有可分为隐晦期(采用人工裂解液如氯仿裂解细胞。裂解液 仍无感染性,噬菌体核酸正在复制,蛋白质衣壳正在合成)和胞内紫积期(裂解 液已呈现侵染性,噬菌体粒子开始装配)。 (2)裂解期:潜伏期后几分钟取的样,噬菌斑数目突然急速增加,表示噬菌 体已装配成熟,并裂解细胞释放出来了。由于宿主细胞的裂解是不同步的,所以 这一时期持续较长时间。用潜伏期的噬菌斑数(感染噬菌体的细菌数)除裂解期 的噬菌斑数(噬菌体的释放数),便得到裂解量,即每个被感染细菌释放的新噬 菌体颗粒的平均数。 (3)平稳期:宿主细胞全部被裂解,噬菌体数目在高处达到稳定。 从一步生长曲线,不仅能了解噬体在菌体内的最短潜伏期和平均裂解量,还
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