4μg8μg λ1 kb TS D jeans-shirt. V入1kb Figure5 ry.Sixth Edition 2007 W.H.Freeman and Company 图5.9DNA与法医。从嫌疑人裤衩和衬衫的血迹分离的DNA用PCR扩增，与嫌疑人和受 害人的DNA样品进行比较，凝胶电泳后放射性自显影。嫌疑人衣服上的血迹DNA与受害 人一致，但与嫌疑人不同。DNA类型偶尔相同的概率大约330亿分之一，因此用这种技术 鉴定的结果非常准确。上样孔分别是：入，Ikb,TS(对照DNA),D(嫌疑人DNA),jeans和 shit(来自嫌疑人衣物的血迹)，V(受害者DNA). 5.2重组DNA技术使生物学各个领域发生了革命性变化 在l970年代Paul Berg,Herbert Boyer,.和Stanley Cohen的开创性工作建立了重组DNA 技术，使生物学从纯粹的分析科学发展成合成科学。采用重组DNA技术，再实验室能够将 无关基因组合起来。新的基因组合能够克隆、扩增、并能被引入适当细胞（在这种细胞内， 宿主DNA合成机器能合成引入的组合基因)。宿主细胞能够转录外源基因，并翻译合成外 源基因所编码的蛋白质产物。最显著的特征是这种技术能永久性改变宿主的遗传特征。 限制性内切酶和DNA连接酶是形成重组DNA分子的关镀工具 现在我们介绍实验室如何构建新DNA分子。目标DNA片断必须与DNA载体共价交联。 载体的必需特性是它能够在适当宿主中能自主复制。质粒是细胞体内存在的染色体外的遗传 物质，是环状双链DNA。入啦菌体是大肠杆菌的病毒。质粒和啦菌体是大肠杆菌的基因克隆 载体(vector)。载体可以用限制性内切酶酶切，酶切后可以接受一个新DNA分子。例如， 质粒pSC101是一个9.9-kb的双链环状DNA分子，有一个单一切点EcoRI。用EcoR酶切 后，产生粘性末端。任何DNA片段，只要两端的粘性序列与EcoRI酶切产生的粘性末端相 同（用相同的限制性内切酶断裂大DNA分子能够获得）就能与载体结合（图5.10）。 DNA片段末端的单链区与质粒酶切后产生末端的单链区互补，退火配对后用DNA连 接酶连接。DNA连接酶需要3'-OH和5'磷酸，将缺口连接成磷酸二酯键。DNA连接酶要求 DNA分子是双链，连接反应需要ATP或NAD提供能量。图 5.9 DNA 与法医。从嫌疑人裤衩和衬衫的血迹分离的 DNA 用 PCR 扩增，与嫌疑人和受 害人的 DNA 样品进行比较，凝胶电泳后放射性自显影。嫌疑人衣服上的血迹 DNA 与受害 人一致，但与嫌疑人不同。DNA 类型偶尔相同的概率大约 330 亿分之一，因此用这种技术 鉴定的结果非常准确。上样孔分别是：，1kb，TS（对照 DNA), D（嫌疑人 DNA), jeans 和 shirt（来自嫌疑人衣物的血迹），V（受害者 DNA). 5.2 重组 DNA 技术使生物学各个领域发生了革命性变化 在 1970 年代 Paul Berg, Herbert Boyer, 和 Stanley Cohen 的开创性工作建立了重组 DNA 技术，使生物学从纯粹的分析科学发展成合成科学。采用重组 DNA 技术，再实验室能够将 无关基因组合起来。新的基因组合能够克隆、扩增、并能被引入适当细胞（在这种细胞内， 宿主 DNA 合成机器能合成引入的组合基因）。宿主细胞能够转录外源基因，并翻译合成外 源基因所编码的蛋白质产物。最显著的特征是这种技术能永久性改变宿主的遗传特征。 限制性内切酶和 DNA 连接酶是形成重组 DNA 分子的关键工具 现在我们介绍实验室如何构建新 DNA 分子。目标 DNA 片断必须与 DNA 载体共价交联。 载体的必需特性是它能够在适当宿主中能自主复制。质粒是细胞体内存在的染色体外的遗传 物质，是环状双链 DNA。噬菌体是大肠杆菌的病毒。质粒和噬菌体是大肠杆菌的基因克隆 载体（vector）。载体可以用限制性内切酶酶切，酶切后可以接受一个新 DNA 分子。例如， 质粒 pSC101 是一个 9.9-kb 的双链环状 DNA 分子，有一个单一切点 EcoRI。用 EcoRI 酶切 后，产生粘性末端。任何 DNA 片段，只要两端的粘性序列与 EcoRI 酶切产生的粘性末端相 同（用相同的限制性内切酶断裂大 DNA 分子能够获得）就能与载体结合（图 5.10）。 DNA 片段末端的单链区与质粒酶切后产生末端的单链区互补，退火配对后用 DNA 连 接酶连接。DNA 连接酶需要 3'-OH 和 5'-磷酸，将缺口连接成磷酸二酯键。DNA 连接酶要求 DNA 分子是双链，连接反应需要 ATP 或 NAD+提供能量