4μg8μg λ1 kb TS D jeans-shirt. V入1kb Figure5 ry.Sixth Edition 2007 W.H.Freeman and Company 图5.9DNA与法医。从嫌疑人裤衩和衬衫的血迹分离的DNA用PCR扩增,与嫌疑人和受 害人的DNA样品进行比较,凝胶电泳后放射性自显影。嫌疑人衣服上的血迹DNA与受害 人一致,但与嫌疑人不同。DNA类型偶尔相同的概率大约330亿分之一,因此用这种技术 鉴定的结果非常准确。上样孔分别是:入,Ikb,TS(对照DNA),D(嫌疑人DNA),jeans和 shit(来自嫌疑人衣物的血迹),V(受害者DNA). 5.2重组DNA技术使生物学各个领域发生了革命性变化 在l970年代Paul Berg,Herbert Boyer,.和Stanley Cohen的开创性工作建立了重组DNA 技术,使生物学从纯粹的分析科学发展成合成科学。采用重组DNA技术,再实验室能够将 无关基因组合起来。新的基因组合能够克隆、扩增、并能被引入适当细胞(在这种细胞内, 宿主DNA合成机器能合成引入的组合基因)。宿主细胞能够转录外源基因,并翻译合成外 源基因所编码的蛋白质产物。最显著的特征是这种技术能永久性改变宿主的遗传特征。 限制性内切酶和DNA连接酶是形成重组DNA分子的关镀工具 现在我们介绍实验室如何构建新DNA分子。目标DNA片断必须与DNA载体共价交联。 载体的必需特性是它能够在适当宿主中能自主复制。质粒是细胞体内存在的染色体外的遗传 物质,是环状双链DNA。入啦菌体是大肠杆菌的病毒。质粒和啦菌体是大肠杆菌的基因克隆 载体(vector)。载体可以用限制性内切酶酶切,酶切后可以接受一个新DNA分子。例如, 质粒pSC101是一个9.9-kb的双链环状DNA分子,有一个单一切点EcoRI。用EcoR酶切 后,产生粘性末端。任何DNA片段,只要两端的粘性序列与EcoRI酶切产生的粘性末端相 同(用相同的限制性内切酶断裂大DNA分子能够获得)就能与载体结合(图5.10)。 DNA片段末端的单链区与质粒酶切后产生末端的单链区互补,退火配对后用DNA连 接酶连接。DNA连接酶需要3'-OH和5'磷酸,将缺口连接成磷酸二酯键。DNA连接酶要求 DNA分子是双链,连接反应需要ATP或NAD提供能量。图 5.9 DNA 与法医。从嫌疑人裤衩和衬衫的血迹分离的 DNA 用 PCR 扩增,与嫌疑人和受 害人的 DNA 样品进行比较,凝胶电泳后放射性自显影。嫌疑人衣服上的血迹 DNA 与受害 人一致,但与嫌疑人不同。DNA 类型偶尔相同的概率大约 330 亿分之一,因此用这种技术 鉴定的结果非常准确。上样孔分别是:,1kb,TS(对照 DNA), D(嫌疑人 DNA), jeans 和 shirt(来自嫌疑人衣物的血迹),V(受害者 DNA). 5.2 重组 DNA 技术使生物学各个领域发生了革命性变化 在 1970 年代 Paul Berg, Herbert Boyer, 和 Stanley Cohen 的开创性工作建立了重组 DNA 技术,使生物学从纯粹的分析科学发展成合成科学。采用重组 DNA 技术,再实验室能够将 无关基因组合起来。新的基因组合能够克隆、扩增、并能被引入适当细胞(在这种细胞内, 宿主 DNA 合成机器能合成引入的组合基因)。宿主细胞能够转录外源基因,并翻译合成外 源基因所编码的蛋白质产物。最显著的特征是这种技术能永久性改变宿主的遗传特征。 限制性内切酶和 DNA 连接酶是形成重组 DNA 分子的关键工具 现在我们介绍实验室如何构建新 DNA 分子。目标 DNA 片断必须与 DNA 载体共价交联。 载体的必需特性是它能够在适当宿主中能自主复制。质粒是细胞体内存在的染色体外的遗传 物质,是环状双链 DNA。噬菌体是大肠杆菌的病毒。质粒和噬菌体是大肠杆菌的基因克隆 载体(vector)。载体可以用限制性内切酶酶切,酶切后可以接受一个新 DNA 分子。例如, 质粒 pSC101 是一个 9.9-kb 的双链环状 DNA 分子,有一个单一切点 EcoRI。用 EcoRI 酶切 后,产生粘性末端。任何 DNA 片段,只要两端的粘性序列与 EcoRI 酶切产生的粘性末端相 同(用相同的限制性内切酶断裂大 DNA 分子能够获得)就能与载体结合(图 5.10)。 DNA 片段末端的单链区与质粒酶切后产生末端的单链区互补,退火配对后用 DNA 连 接酶连接。DNA 连接酶需要 3'-OH 和 5'-磷酸,将缺口连接成磷酸二酯键。DNA 连接酶要求 DNA 分子是双链,连接反应需要 ATP 或 NAD+提供能量