实验九、畜禽原虫病 内容： 1.伊氏锥虫形态观察及实验室诊断。 牛双芽巴贝斯虫、牛巴贝斯虫、牛泰勒虫形态观察。 目的 ，能够鉴别其主要形态特征并掌握伊氏锥虫的常规诊断法 evansi在分类学上属于鞭毛虫纲Mastigophora锥虫科 Trypano somatidae属Trypanos 宿主与寄生部位：寄生于马、驴、骡、牛、水牛、骆驼和犬等家畜的血浆内 形态特征：伊氏锥虫为单形锥虫。 长1834微米，宽12微米， 平均为24×2微米，前端比后 健盗膜发热薇多策电游高豫毛长6微发内细胞核〈主核)位于虫休中尖椭圆形的 少革 核的染 多在枚的 在姬氏染色的血片中，核 传播老 蝇及蝇是其主要传播者 伊氏锥虫病实验室诊断 (1)全血压滴标本检查法 在洁净的载玻片上滴病畜血液一小滴，与放在载玻片上的一滴生理盐水混合后，覆以盖玻 片，用400600倍高倍镜观察，如有锥虫，多在血细胞间活泼地运动。但每次镜检必须观察100200 入视野以上。 冬季室温过低时，锥虫活动力减弱不易观察到， 这时可将玻片放在酒精灯上稍稍加 量体粉强维晒被牛外，在血液干调后检在，维虫往往死亡影咱检查结果。此法在血内 时，染色标本检查法 从耳静脉平 至心作二张以上涂片 兰色，细胞核和鞭毛染成淡红紫色。 虫体原生质染成淡 「容易得到阳性结果 (3)血液厚滴涂片标本检查法 取血 一大滴放在载玻片中央处，用另一玻片角将血液堆成直径约1厘米的涂面，在空气中自 然干燥，然后用冰醋酸1毫升，加蒸馏水100毫升配成的液体处理数分钟将红细胞全部溶解后，再使 涂片干燥。以甲醇固定后，再用姬萨染色镜检，此法比涂片染色标本容易找到虫体。 感在预先装有枸修酸钠每毫升血约用5毫克)的沉淀管内， 标不检于 可在 这管然 23小时 取红细胞层表面物少量，滴一小滴于载玻片上，作成压滴标本镜检，每头牛作2>4个压滴标本，每个 压滴标本应观察100个以上的视野 活锥虫集结试验（团集反 滴置于载玻片上，再加入 容里病则薇镜行若到虫体就以后编相家，有鞭毛的一 备忠有锥 可取可疑动物的血液，接种于实验动物（小白鼠0.21.0毫 接种后第二天开始用压滴法检查尾血中是否有锥虫出现，至少要持续检查 丹的皮下求腹腔大发体可过不粉看为明性。此法出率较高，一 个月。如 (7)间接血疑试验 ①致敏血球悬液的制造： 锥虫抗原的制备：用小白鼠从疫区采回虫种， 分别保种于海猪备用，用时再取海猪心 用任两株的混合里 )保程 余下 中渣可用型 实验九、畜禽原虫病 一．内容：     1．伊氏锥虫形态观察及实验室诊断。     2．牛双芽巴贝斯虫、牛巴贝斯虫、牛泰勒虫形态观察。     3．弓形体形态观察。     4．鸡、兔球虫形态观察。     5．住肉抱子虫形态观察。 二．目的：通过上述虫体观察，能够鉴别其主要形态特征并掌握伊氏锥虫的常规诊断法。 三．参考资料：     1．伊氏锥虫Trypanosoma evansi在分类学上属于鞭毛虫纲Mastigophora锥虫科 Trypanosomatidae属Trypanosoma。     宿主与寄生部位：寄生于马、驴、骡、牛、水牛、骆驼和犬等家畜的血浆内。     形态特征：伊氏锥虫为单形锥虫。长18~34微米，宽1~2微米，平均为24×2微米，前端比后 端尖；波动膜发达，宽而多皱曲，游离鞭毛长6微米，细胞核（主核）位于虫体中央，呈椭圆形，动 基体距虫体后端约1.5微米，呈圆形或短杆形，胞浆内含有少量的空泡；核的染色质颗粒多在核的前 部。在压滴血液标本中，原地运动时相当活泼，而前进运动时比较迟缓，在姬氏染色的血片中，核 与动基体呈深红紫色，鞭毛呈红色，波动膜呈粉红色，原生质呈淡天兰色。    传播者：虻、螫蝇及虱蝇是其主要传播者。   伊氏锥虫病实验室诊断：     （１）全血压滴标本检查法     在洁净的载玻片上滴病畜血液一小滴，与放在载玻片上的一滴生理盐水混合后，覆以盖玻 片，用400~~600倍高倍镜观察，如有锥虫，多在血细胞间活泼地运动。但每次镜检必须观察100~200 个视野以上。冬季室温过低时，锥虫活动力减弱不易观察到，这时可将玻片放在酒精灯上稍稍加 温，以增强锥虫的活动力。此外，在血液干涸后检查，锥虫往往死亡，影响检查结果。此法在血内 虫体较少时，往往不易被发现。 （２）血涂片染色标本检查法 从耳静脉采血，至少作二张以上涂片，染色后镜检有无虫体用姬姆萨染色后，虫体原生质染成淡 兰色，细胞核和鞭毛染成淡红紫色。本法于病初体温升高时，采血作涂片，容易得到阳性结果。     （３）血液厚滴涂片标本检查法     取血一大滴放在载玻片中央处，用另一玻片角将血液堆成直径约1厘米的涂面，在空气中自 然干燥，然后用冰醋酸１毫升，加蒸馏水100毫升配成的液体处理数分钟将红细胞全部溶解后，再使 涂片干燥。以甲醇固定后，再用姬萨染色镜检，此法比涂片染色标本容易找到虫体。     （４）集虫检查法     自颈静脉采血约５毫升，盛在预先装有枸橼酸钠（每毫升血约用５毫克）的沉淀管内，混 合后，以1500转/分速度，离心沉淀3~5分钟，此时红细胞沉淀于管底，白细胞在红细胞上面。由于 虫体比重与白细胞相近，故虫体集中于白细胞层中。用吸管取白细胞层的材料作成压滴标本检查， 可以提高虫体的检出率。在没有离心机的情况下，可在5~10毫升的试管中预先放入２％枸橼酸钠生 理盐水2~5毫升，从颈静脉采血2~5毫升，轻轻摇匀，放置在试管架上，自然沉淀2~3小时，用吸管吸 取红细胞层表面物少量，滴一小滴于载玻片上，作成压滴标本镜检，每头牛作2~4个压滴标本，每个 压滴标本应观察100个以上的视野。     （５） 活锥虫集结试验（团集反应）     用人工感染小白鼠血中活锥虫血一滴置于载玻片上，再加入一滴被检查的牛清后，如此家 畜患有锥虫病则显微镜下可看到虫体就以后端相靠拢，有鞭毛的一端向外集结菊花瓣状。如被检牛 未受锥虫感染则虫体不集结。     （６）动物接种试验     在上述各种方法尚不能确诊时，可取可疑动物的血液，接种于实验动物（小白鼠0.2~1.0毫 升）的皮下或腹腔内，接种后第三天开始用压滴法检查尾血中是否有锥虫出现，至少要持续检查一 个月。如一个月后未发现虫体，可以不再检查，判为阴性。此法检出率较高。     （７）间接血疑试验     ①致敏血球悬液的制造：     Ａ、锥虫抗原的制备：用小白鼠从疫区采回虫种，分别保种于海猪备用，用时再取海猪心 血接种于小白鼠，待见虫后用任两株的混合虫株接种于大白鼠或预先摘除脾脏的犬，经过四、五天 发病后将其放血于抗凝生理盐水之后，并用生理盐水多次离心（3000转/分，20分钟）洗涤将纯白虫 体，然后按虫体压积加pＨ7.2磷酸缓冲盐水（PBS）作10倍稀释。放低温（－25℃左右）保存备用。 当用其致敏血球时，取出在低温条件下反复冻融数次。离心取上清液即为抗原，余下的虫渣可用玛