瑙研钵研磨两小时后再冻融，离心取上清液并入上述抗原中，再按原虫体积计，加入pH7.2PBS中将 其稀释到1/500的浓度，即可用于致敏。 去上清液， 采取 血若干 用5 再用售大反复离心的公按票积翻 ,经常摇动。然后用2000转/分离心10分钟去上清液 (可收回反 得雪特男的聊大务洗态用政液的血绣液宝 ,用 37℃的水浴鞣化30分钟，同法离心去上清再用PBS离心洗三次，再配成5%的血球悬液， 等量加入含2%戊二醛的PBS于上述鞣化过的血球悬液中，摇匀，置室温醛化两小时， 同法离心去上清液 可回收反复用用，方法同内酮醛) 再用PS离心洗 严 新配的1/500抗原液直拉 钟， 即成致敏血球悬液 同时同法， 非致敏血球悬 作时昭压 凝集试验及其结果的判定 用V型或U型微量血凝板， 将被检血清用pH7.2PBS作倍比稀释。每孔0.0250.05毫升，同法做 两排。 一排加致敏血球悬液为测定排，另 排加非致敏血球悬液作对照排。每孔滴一滴（人用4号 针头，约0.007毫升)，同时两排后边再设1`2孔仅加稀释液PBS与血球悬液的空白对照，摇匀放室温 边沿呈光滑圆点状时，即可判定结果，测 一也球花 林凝集成 生双芽巴贝斯虫属于 巴贝斯虫科 Babesiidae 的巴斯属Babesia, (1)牛双芽巴贝斯虫 B.bigemina 宿主及寄生部位：寄生于黄牛、水牛的红细胞内。 形态特征：是一种大型虫体，其长度大于红细胞半径。有环形、椭圆形、梨形（单个或成 还可以见到 叶形的虫体 特征性虫 虫体边缘部。 传语牛色洗 microplus. 宿主及寄生部位：牛的红细胞内，属小型虫体 形特证：形念有环状、雨圆形 个或成双的梨形、边虫形和阿米巴形等，在繁殖过程 中出现三叶形的虫体。 何虫体是以两个 君炎梨体的长度小于红细径，其有 多数 子硬蜱和全沟硬 宿主及寄生部位：宿生在牛的网状内皮细胞和红细胞内 形态特征：形态多样化，环形虫体呈戒指状，最为常见，染色质一团，居虫体一侧边缘 上，姬氏法染色后，原生质呈淡兰色，染色质呈红色。大小为0.81.7微米，椭圆形虫体比环形者略 长略大，其长宽比例为1.5：1，两端钝圆，大小为1.52.1×0.7微米。杆状虫体 而阻， 而细， 大小0 由4 虫体到 个红外内的闪皮系统的虫 体 存在于淋巴细胞的单核细胞 游离于淋巴 姬氏染色后 型的原表包备有1不的位丙光米的， 红色或暗紫色的染色质 榴体为中体 裂殖体阶段，它在形态上有多种类型， 并产生直径为22.5微米的大裂殖子，另一种为小裂殖体，它含有直径为0.30.8微米的染色质颗 粒，并产生直径为0.71.0微米的小裂殖子。 传播者：璃眼牌属的各种螺。瑙研钵研磨两小时后再冻融，离心取上清液并入上述抗原中，再按原虫体积计，加入pＨ7.2PBS中将 其稀释到１/500的浓度，即可用于致敏。     Ｂ、致敏血球的制备，步骤如下：     ａ、采取2~5岁健康公绵羊脱纤血若干，用生理盐水将其稀释20倍，2000转/分离心15分钟 去上清液，再用生理盐水反复离心洗三次，然后按血球压积计，用pH7.2PBS配成5％血球悬液。     ｂ、等量加入含２％丙酮醛的PBS于5％的血球悬液中，摇匀，置室温30分钟后。再置普通 冰箱内醛化固定17小时，经常摇动。然后用2000转/分离心10分钟去上清液（可收回反复再几次，用 时则直接将血球压积稀释成2.5％的悬液即成）用PBS离心洗三次，再用PBS配成５％的血球悬液。     ｃ、等量加入１/２万的鞣酸生理盐水溶液于上述醛化过的５％的血球悬液中，摇匀，置 37℃的水浴鞣化30分钟，同法离心去上清再用PBS离心洗三次，再配成５％的血球悬液。     ｄ、等量加入含２％戊二醛的PBS于上述鞣化过的血球悬液中，摇匀，置室温醛化两小时， 同法离心去上清液（可回收反复用用，方法同丙酮醛），再用PBS离心洗三次。     ｅ、用上述新配的1/500抗原液直接稀释血球压积成50％血球悬液，放37℃水中热致敏40分 钟，或放4℃冷致敏7天，最后离心去上清液和用PBS离心洗三次，再用含0.5~1％健康兔血清PBS配成 ２％的血球悬液，并按0.1％计，加叠氮钠防腐，即成致敏血球悬液。同时同法，做一批不加抗原的 非致敏血球悬液，作对照用。     ②、凝集试验及其结果的判定 用Ｖ型或Ｕ型微量血凝板，将被检血清用pＨ7.2PBS作倍比稀释。每孔0.025~0.05毫升，同法做 两排。一排加致敏血球悬液为测定排，另一排加非致敏血球悬液作对照排。每孔滴一滴（人用４号 针头，约0.007毫升），同时两排后边再设1~2孔仅加稀释液PBS与血球悬液的空白对照，摇匀放室温 （25~30℃）1~2小时。待空白对照孔血球全部淀于孔底，边沿呈光滑圆点状时，即可判定结果，测 定排各孔的血球呈均匀薄层平铺于孔底似毛玻璃状，或其边沿有不规则的皱缩。又或血球凝集成一 小圆圈状，或其边沿有小颗粒血球凝块等。均可判为阳性反应。否则如空白对照孔为阴性反应，对 照排可能也有非特异性凝集， 但其凝集的最高倍数要比测定排低两个滴度以上。 并且测定排凝 集价要在80度以上才能判定被检血清为阳性。     2．牛双芽巴贝斯虫属于孢子虫纲Sporozoa，血孢子虫目Haemosporidia，巴贝斯虫科 Babesiidae 的巴斯属Babesia，牛泰勒虫属于泰勒科Theieeriidae泰勒属Theileria。     （１）牛双芽巴贝斯虫 B.bigemina     宿主及寄生部位：寄生于黄牛、水牛的红细胞内。     形态特征：是一种大型虫体，其长度大于红细胞半径。有环形、椭圆形、梨形（单个或成 对）和变形虫形等不同形状的虫体，在进行出芽生殖过程中，还可以见到三叶形的虫体。特征性虫 体是两个梨籽形虫体以尖端相连构成锐角，其长度大于红细胞半径，绝大多数位于红细胞的中央。 一个红细胞内多为1~2个虫体，姬姆萨染色后，原生质呈淡兰色，边缘较深，中央部分淡染或不着 色，呈空泡状的无色区，染色质多为两团，位于虫体边缘部。环形虫体的直径为1.4~3.2微米，单梨 形虫体长2.8~6微米。     传播者：微小牛蜱B.microplus。     （２）牛巴贝斯虫B.bovis     宿主及寄生部位：牛的红细胞内，属小型虫体。     形态特征：形态有环状、椭圆形、单个或成双的梨形、边虫形和阿米巴形等，在繁殖过程 中出现三叶形的虫体。特征性虫体是以两个梨形虫体以尖端相连构成钝角，多位于红细胞的边缘， 少数位于中央。梨形虫体的长度小于红细胞半径。具有一团染色质。病的初期以环形和边虫形为 多，以后出现梨形虫体。     传播者：蓖子硬蜱和全沟硬蜱 I.persulcatus。     （３）牛泰勒虫 多数指的是环形泰勒虫T.annulata     宿主及寄生部位：宿生在牛的网状内皮细胞和红细胞内。     形态特征：形态多样化，环形虫体呈戒指状，最为常见，染色质一团，居虫体一侧边缘 上，姬氏法染色后，原生质呈淡兰色，染色质呈红色。大小为0.8~1.7微米，椭圆形虫体比环形者略 长略大，其长宽比例为1.5:1，两端钝圆，大小为1.5~2.1×0.7微米。杆状虫体一端较粗，一端细， 弯曲或不弯曲，染色质团在粗端，形似钉子或大头针，长约1.0~2.0微米。圆点状或边虫状虫体没有 明显的原生质，由染色质组成，大小为0.7~0.8微米，十字形虫体不常见，由４个圆点状虫体组成， 原生质不明显，大小为1.6微米，一个红细胞内的虫体数可以有1~12个不等，常见的1~3个，各种形 态的虫体可同时出现于一个红细胞内。另外寄生在网状内皮系统的虫体称石榴体（或称柯赫氏兰 体），存在于淋巴细胞的单核细胞内，也可游离于淋巴液中，偶见于血浆中，大小为2.2~27.5微 米，姬氏染色后，在浅兰色的原浆里包含有数目不等的微红色或暗紫色的染色质，石榴体为虫体的 裂殖体阶段，它在形态上有多种类型，一种为大裂殖体，体内含有直径0.4~1.9微米的染色质颗粒， 并产生直径为2~2.5微米的大裂殖子，另一种为小裂殖体，它含有直径为0.3~0.8微米的染色质颗 粒，并产生直径为0.7~1.0微米的小裂殖子。 传播者：璃眼蜱属的各种蜱