维普讯 htp://www.eqvip.com.ipcom 第12卷第1期 鱼类病害研究 1990年 草鱼出血病病毒所致肝功能代谢失调 机理的初步研究 朱心玲谢巧雄 中国科学院水生生物研究所) 草鱼出血病是我国淡水养殖业中位害较大流行广的一种疾病,此病的病原体已被确定 已被定名为草鱼呼肠弧病毒( Reovirus of Grass Carp简称GCV)关于草的组织病理 的研究,已由郑德崇等(1984)、芦全章等1985)报导,作者(1987)也曾报导了此病的 血液病理研究结果。上述的研究均阐明病毒侵袭宿主后,被使全身毛细血管受损,导致组织 出血,细胞坏死、本文研究的目的旨在探讨病毒侵宿主造成肝脏微循环障碍所致肝细胞损 害、环死,引起肝功能代谢失调的机理。 材料与方法 病毒毒源武汉市东西湖养殖场水产试验所的发病池中收集的病鱼组织,贮存于20℃ 冰箱,备用。 试验鱼体重为30—80克的草鱼,取自本所试验场试验前需用2%盐水作2030分钟 的体外消毒,然后放入去氯自来水中暂养约24小时,备用。 人工感染的试验步骤 一、感染;将冰冻保存的病鱼组织,制成101的病毒悬液,然后,每尾按0.01毫升1 克体重的注射量,注入鱼体腹腔内,尔后放入去氯自来水饲养观察,感染期间不喂食,水温 控制在2830℃。 二、血样的收集:潜伏期病鱼的血样收集是取经注射感染4天,外观无症状的病鱼;发 展期病鱼血样收集是取经感染后症状明显,垂死的病鱼另设置未感染病毒的对照用切 开围心腔法采血。自然发病病鱼的血样收集:潜伏期病鱼的血样采集是在初发出血病的病池 中,随意捕用无症状的鱼;发展期病鱼是逐尾捞取病池内症状明显的病鱼。平均体重是15.88 克,用切开围心腔法采血。 血样的制备采出的血液置4℃冰箱中经30分钟左右,离心(3000转/分),取出上清液, 血浆或清置0℃保存,备用。 血液临床化学分析 酶活性的测定:谷丙转氨酶(GPT)用金氏直接显色法异柠檬酸脱氢酶(ICDH)用反 应产物a一酮二酸和2,4一二基苯肼的呈色反应法碱性酸酶(AKP)用4氨基 安替比林法鸟氨酸氨甲酰移换酶(OCT)用鸟氨酸和氨基甲酰磷酸二锂为基质,用二乙酰单第12卷第1期 鱼 类 病 害 研 究 199o年 草鱼出血病病毒所致肝功能代谢失调 机 理 的 初 步 研 究 朱J玲 谢 雄 (中 国科 学 院水4z'!-2l物 研究所 ) 草 鱼 出血病是 我 国淡 水养殖业 中危害较大流 行广 的一种疾 病，此病 的病原体 已被确定井 已被定名为草鱼呼肠 弧病 毒 (ReovirusofGrass Carp 简称GCRV)戈于 草盘的组织病理 的研览， 已由郑 簿崇 等 (1984)、芦全 章等 (1985)报导 ，佧 者 (1987)也曾撤导 了此病的 血 液病 理研 究结 果。 上述 的研 究均 阐明病毒侵袭 宿主后，被使 垒身毛细 血管 受损 ，导 致纽纵 出血 ，细 胞 坏死 、本 文研 究 的 目 的 旨在 探 讨 病 毒 侵 袭 宿 主造 成 肝 脏 微循 环 障 碍 所 致 肝 细 胞 损 害 、坏 死， 引起肝 功能代谢失讯的机理 。 材 料 与 方 法 病毒毒 源 武汉市东西湖养殖 场水产 试验所的发病池 中收集 的病鱼 组织 ，贮存 于 一20℃ 珠箱，备用。 试 验 鱼 体 重 为 30— 8O克 的草 鱼 ， 取 自本所 试 验 场。 试 验 前需 用 2 盐 水作 20— 3O分 钟 的体外 消毒 ，然 后放入去 氯 自来水 中暂养约 24小 时，备用。 人 工感 染的试 验步骤 一 感 染。 将冰冻保存 的病鱼组织，制 成 10I1的病毒悬 液，然后 ，每 尾按 0．01毫升 1 克 俸重 的注射量，注入鱼 体腹腔内，尔后放入去氯 自来水饲养观察 ，感染期 间不喂食 ，水温 控 制在 28— 3O℃。 二 、 血 样 的 收 集 。 潜 伏 期 病 鱼 的血 样 收集 是 取 经 注射 感染 4天 ， 外 观 无 症 状 的病 鱼 }发 展 期 病 鱼 血 样 收 集 是 取 经 感 染 后症 状 明显 ， 垂 死 的病 包 ， 另设 置 未 感 染 病 毒 [由对 照 龟 。用 切 开 围心腔法 采 【缸。 自然发 病病翅的血样 收集 ：潜 伏期病鱼 的血样采 集是 ：初发 出I缸病 的病 池 中，随 意捕用无症状 的鱼 ；发 展期病鱼是逐尾捞取病 池内症状 明显 的病鱼。平均体重是15．88 克，用切开 围心腔法采血 血 样 的 制 备 采 出的 血 液 置 4℃ 冰箱 中经 3O分 钟 左 右 ，离 心 (8000转 ／分 )，取 出上 清 液 ， 血 浆 或 清 置 0℃保 存 ，备 用 。 血液 临 床 化 学 分 析 酶活性 的测定。 谷丙转氨 酶 (GPT)用金 氏直接显色 法J异柠檬酸脱 氢酶(ICDH )用 反 应产物 一酮戊二酸和 2， 4一二硝基苯肼的呈色反应法，碱性磷酸酶 (AKP)用 4一氨基 安替 比林 法} 鸟氮酸氮 甲酰移换酶 (OCT)用 呜舞酸和氨基 甲酰磷酸二锂为基质，甩二乙酰 单 维普资讯 http://www.cqvip.com