常用试剂的配制 (一)缓冲液 1.0.01MPBS液(PH7.2)NaCl8g,Na2HPO41.15g,KH2P040.2g(NaH2P04,加双蒸水至1000ml。 2.0.05MTBS液(PH7.4)Tris(三羟甲基胺基甲烷)12.lg,Nacl17.5g,加双蒸水至1500m1,在搅拌下加 浓HCL至PH7.4,再加双蒸水至2000m1。 3.0.02MTBS液(PH8.2)Tris4.84g,Nacl17.5g,BSA2.0g,NaN31.0g,加双蒸水至1500ml,在搅拌 下加浓HCL至PH8.2,再加双蒸水至2000m1。(BSA一牛血清白蛋白;NaN3一叠氮钠,为防腐剂)。 4.0.05MTB液(PH7.6)先配制0.05MTB液:Tris60.75g,1NHCL约420ml,双蒸水至1000m1。 配制方法:先以少量双蒸水(300ml)溶解Tris,加入HCL后,再用1NHCL或 in NaOH将PH值调至7.6, 加双蒸水至1000m1。用时将0.5MTB稀释10倍,即为0.05MTB液(PH7.6)液 5.0.05M醋酸缓冲液(PH3.5)先配制0.IM的醋酸和醋酸钠溶液:0.IM醋酸液:冰醋酸5.75ml,双蒸水 加至1000ml。0.IM醋酸钠液:醋酸钠13.6g,双蒸水100om。再配制0.IM醋酸缓冲液0.IM醋酸210m0.IM醋 酸钠790ml,混合即可。用时将0.IM的醋酸缓冲液稀释5倍,即为0.05M醋酸缓冲液(PH5.2) 6.枸橼酸缓冲液 (1)PH3.5:枸橼酸2.55g,枸橼酸钠2.35g双蒸水加至100ml (②)PH6.0:21.0lg枸橼酸加入蒸馏水l000m10.M枸橼酸:29.41g枸橼酸钠加入蒸馏水1000ml0.1M枸橼 酸钠。使用时取0.1M枸橼酸9ml和0.IM枸橼酸钠4l皿l,再加入蒸馏水450ml,即配成0.01M的枸橼酸缓冲液 (PH6.0±0.1)。用于微波修复抗原时 (二)显色液 1.DAB① Diaminobenzidine)显色液DAB(3.3—二氨基联苯胺四盐酸盐)50mg 0.05MTB(或0.0MPBS)100m1,30%H20230-40μ1。 配制方法:先以少量0.05MTB(或0.01MPBS)溶解DAB,充分溶解后加入剩余的TB或PBS,摇匀后(避 光)过滤,显色前加入30%H202,宁少勿多,便于掌握反应过程。阳性为棕黄色颗粒。(DAB有致癌作用 操作时应格外小心,避免直接与皮肤接触,用后的器皿应充分冲洗,用后的DAB液不应冲入下水道,应集中 深埋或清洁液处理后弃之) 2.AEC(3- amino-9- ethy lcarbozloe)显色液AEC(3氨基-9-乙基卡巴唑)20mg,二甲酰胺(DMF) 2.5m1,0.05M醋酸缓冲液(PH5.5)50m1,30%H20225μ1。 配制方法:先将AEC溶于DM中,再加入醋酸缓冲液充分混匀。临显色前加入30%H202液。镜下控制显色 时间。阳性为深红色颗粒 3.4-氯-1萘酚(4-CL-1- NapHthol)显色液4-氯-1萘酚100mg,无水乙醇10ml,0.05MTB(PH7.6) 190m1,30%H20210ul。 配制方法:先将4-氯-1萘酚溶于无水乙醇中,然后再加入TB190m1,用前加入30%202,显色时间5-20分 钟。阳性结果为蓝或深蓝色 4.α-萘酚显色液①α一萘酚AS-BI磷酸盐1mg,坚固红TR盐2ng,底物缓冲液2ml常用试剂的配制 （一)缓冲液 1.0.01MPBS液(PH7.2) NaCl 8g，Na2HPO4 1.15g，KH2PO4 0.2g（NaH2PO4，加双蒸水至1000ml。     2.0.05MTBS液(PH7.4) Tris(三羟甲基胺基甲烷) 12.1g，Nacl 17.5g，加双蒸水至1500ml，在搅拌下加 浓HCL至PH7.4，再加双蒸水至2000ml。     3.0.02MTBS液（PH8.2）Tris 4.84g，Nacl 17.5g，BSA 2.0g，NaN3 1.0g，加双蒸水至1500ml，在搅拌 下加浓HCL至PH8.2，再加双蒸水至2000ml。（BSA—牛血清白蛋白；NaN3—叠氮钠，为防腐剂）。     4.0.05MTB液（PH7.6）先配制0.05MTB液：Tris 60.75g，1N HCL约420ml，双蒸水至1000ml。     配制方法：先以少量双蒸水（300ml）溶解Tris，加入HCL后，再用1N HCL或1N NaOH将PH值调至7.6，再 加双蒸水至1000ml。 用时将0.5MTB稀释10倍，即为0.05MTB液（PH7.6）液。     5.0.05M醋酸缓冲液（PH3.5） 先配制0.1M的醋酸和醋酸钠溶液：0.1M醋酸液：冰醋酸5.75ml，双蒸水 加至1000ml。0.1M醋酸钠液：醋酸钠13.61g，双蒸水1000ml。再配制0.1M醋酸缓冲液0.1M醋酸210ml 0.1M醋 酸钠790ml，混合即可。用时将0.1M的醋酸缓冲液稀释5倍，即为0.05M醋酸缓冲液（PH5.2）。     6.枸橼酸缓冲液     (1)PH3.5：枸橼酸2.55g，枸橼酸钠2.35g双蒸水 加至100ml。     (2)PH6.0：21.01g枸橼酸加入蒸馏水1000ml 0.1M枸橼酸；29.41g枸橼酸钠加入蒸馏水1000ml 0.1M枸橼 酸钠。使用时取0.1M枸橼酸9ml和0.1M枸橼酸钠41ml，再加入蒸馏水450ml，即配成0.01M的枸橼酸缓冲液 （PH6.0±0.1）。用于微波修复抗原时。     (二）显色液 1.DAB (Diaminobenzidine)显色液 DAB（3.3—二氨基联苯胺四盐酸盐）50mg，     0.05MTB(或0.01MPBS) 100ml，30%H2O2 30-40μl。     配制方法：先以少量0.05MTB（或0.01MPBS）溶解DAB，充分溶解后加入剩余的TB或PBS，摇匀后（避 光）过滤，显色前加入30% H2O2，宁少勿多，便于掌握反应过程。阳性为棕黄色颗粒。（DAB有致癌作用， 操作时应格外小心，避免直接与皮肤接触，用后的器皿应充分冲洗，用后的DAB液不应冲入下水道，应集中 深埋或清洁液处理后弃之）。     2.AEC（3-amino-9-ethylcarbozloe）显色液 AEC（3-氨基- 9-乙基卡巴唑）20mg，二甲酰胺（DMF） 2.5ml，0.05M醋酸缓冲液（PH5.5）50ml，30% H2O2 25μl。     配制方法：先将AEC溶于DMF中，再加入醋酸缓冲液充分混匀。临显色前加入30% H2O2液。镜下控制显色 时间。阳性为深红色颗粒。     3.4-氯-1萘酚（4-CL-1-NapHthol）显色液 4-氯-1萘酚100mg，无水乙醇10ml，0.05MTB（PH7.6） 190ml，30%H2O2 10μl。     配制方法：先将4-氯-1萘酚溶于无水乙醇中，然后再加入TB190ml，用前加入30%H2O2，显色时间5-20分 钟。阳性结果为蓝或深蓝色。     4.α-萘酚显色液①α-萘酚AS-BI磷酸盐1mg，坚固红TR盐2mg，底物缓冲液2ml