二甲基甲酰胺(DMF)40u1 配制方法:先将α-萘酚AS-BI磷酸盐溶于40μ1DWF中,再加入底物缓冲液21,临用前10分钟加坚固红 TR盐。 底物缓冲液(PH8.2-8.3):0.2 M Tris5oml,0. IM HCL4oml,Mg2CL·6H2020.3mg,左旋咪唑 20.4mg,双蒸水加至10oml。结果为玫瑰红色,若在底物显色液中用坚固兰B盐代替坚固红TR盐,终产物 为深蓝色。 5.α-萘酚显色液②α-萘酚AS-BI磷酸盐5ng,DMF0.05ml,丙二醇缓冲液(0.05M,PH9.8)5ml,坚牢 蓝BB2mg 配制方法:先将α-萘酚溶于DMF中,然后加入丙二醇缓冲液,临用前加入坚牢蓝BB,溶解过滤后使用。 丙二醇缓冲液(储备液):2mol/L:2-氨基-2-甲基-1.3丙二醇35.64g,6mol/LHCL32ml,0.005 M MgCL2 4ml,左旋咪唑480mg,双蒸水加至200ml,用HCL或NaOH调PH至9.8,取上述储备液lml用双蒸水稀释至40m 备用。阳性结果为蓝色颗粒 6.a-萘酚显色液③a-萘酚15mg,DMF0.5m1,坚固蓝BB盐30ng,0.05 M Tris-HCL(PH.1)50m1,左旋 咪唑12mg。 配制方法:先将α-萘酚溶于D中,加λ坚固蓝,再加λTris-HCL缓冲液,最后加λ左旋咪唑,完全溶 解过滤后立即使用。显色为37oC,15-30min,用0.1%中性红复染30-60s自来水冲洗,丙酮分化5秒钟,流水 冲洗。阳性结果为蓝色,细胞核为红色或紫色。 7.银显色液 (1)硝酸银显色液:①2%明胶(或25%阿拉伯胶水溶液60ml。②枸橼酸缓冲液(PH3.5)10m。③对苯二 酚1.7g加双蒸水至10ml。④硝酸银50ng加双蒸水至2ml。①~③液用前依次混合,最后加入④液,注意避 光 (2)乳酸银显色液:①20%阿拉伯胶60ml。②枸橼酸缓冲液(PH3.5)10ml。③对苯二酚0.85g/15ml。④乳 酸银110mg/15m1。以上①~③液用前依次混合,最后加④液,注意避光 上述两种显色液的25%阿拉伯胶可用双蒸水代替,但此时反应明显加快,镜下密切观察。 (3)醋酸银显色液:①硝酸银100mng/50ml双蒸水。②10%明胶10ml。③枸橼酸缓冲液(PH3.5)1.7g加双 蒸水至10m1。④对苯二酚600mg 配制方法:将对苯二酚溶于③液,然后将②③液混合过滤,再加入①液。 (三)酶消化液 1.0.1%胰蛋白酶胰蛋白酶100mg,0.1%氯化钙(PH7.8)100ml。 配制方法:先配制0.1%氯化钙,用0.IM的NaOH将其PH值调至7.8,然后加入胰蛋白酶充分溶解。用前将 胰蛋白酶消化液在水溶中预热至37°C,消化时间10-30mina 2.0.4%胃蛋白酶胃蛋白酶400mg,0. IN HCL100ml。 配制方法:先配制0. IN HCL,然后将胃蛋白酶充分溶解,预热至37°C后使用,消化时间30分钟左右。 (四)粘合剂 1.铬矾明胶液铬矾(或甲铬矾)0.5g,明矾5g,蒸馏水1000m二甲基甲酰胺（DMF）40μl。     配制方法：先将α-萘酚AS-BI磷酸盐溶于40μl DMF中，再加入底物缓冲液2l，临用前10分钟加坚固红 TR盐。     底物缓冲液（PH8.2-8.3）：0.2M Tris 50ml，0.1M HCL 40ml，Mg2CL·6 H2O 20.3mg，左旋咪唑 20.4mg，双蒸水 加至100ml。 结果为玫瑰红色，若在底物显色液中用坚固兰BB盐代替坚固红TR盐，终产物 为深蓝色。     5.α-萘酚显色液②α-萘酚AS-BI磷酸盐5mg，DMF 0.05ml，丙二醇缓冲液（0.05M，PH9.8）5ml，坚牢 蓝BB2mg。     配制方法：先将α-萘酚溶于DMF中，然后加入丙二醇缓冲液，临用前加入坚牢蓝BB，溶解过滤后使用。 丙二醇缓冲液（储备液）：2mol/L：2-氨基-2-甲基-1.3丙二醇35.64g，6mol/LHCL 32ml，0.005M MgCL2 4ml，左旋咪唑480mg，双蒸水 加至200ml，用HCL或NaOH调PH至9.8，取上述储备液1ml用双蒸水稀释至40ml 备用。阳性结果为蓝色颗粒。     6.α-萘酚显色液③ α-萘酚15mg，DMF0.5ml，坚固蓝BB盐30mg，0.05M Tris-HCL(PH9.1) 50ml， 左旋 咪唑12mg。     配制方法：先将α-萘酚溶于DMF中，加入坚固蓝，再加入Tris-HCL缓冲液，最后加入左旋咪唑，完全溶 解过滤后立即使用。显色为37oC，15-30min，用0.1%中性红复染30-60s自来水冲洗，丙酮分化5秒钟，流水 冲洗。 阳性结果为蓝色，细胞核为红色或紫色。      7.银显色液     ⑴硝酸银显色液： ①2%明胶（或25%阿拉伯胶水溶液60ml。②枸橼酸缓冲液（PH3.5）10ml。③对苯二 酚1.7g加双蒸水至10ml。④硝酸银50mg加双蒸水至2ml。 ①～③液用前依次混合，最后加入④液，注意避 光。     ⑵乳酸银显色液：①20%阿拉伯胶60ml。②枸橼酸缓冲液（PH3.5）10ml。③对苯二酚0.85g/15ml。④乳 酸银110mg/15ml。以上①～③液用前依次混合，最后加④液，注意避光。     上述两种显色液的25%阿拉伯胶可用双蒸水代替，但此时反应明显加快，镜下密切观察。     ⑶ 醋酸银显色液：①硝酸银100mg/50ml双蒸水。②10%明胶10ml。③枸橼酸缓冲液（PH3.5）1.7g加双 蒸水至10ml。④对苯二酚600mg。     配制方法：将对苯二酚溶于③液，然后将②③液混合过滤，再加入①液。     （三）酶消化液   1.0.1%胰蛋白酶胰蛋白酶100mg，0.1%氯化钙（PH7.8）100ml。     配制方法：先配制0.1%氯化钙，用0.1M的NaOH将其PH值调至7.8，然后加入胰蛋白酶充分溶解。用前将 胰蛋白酶消化液在水溶中预热至37oC，消化时间10-30min。 2.0.4%胃蛋白酶胃蛋白酶400mg，0.1N HCL 100ml。     配制方法：先配制0.1N HCL，然后将胃蛋白酶充分溶解，预热至37oC后使用，消化时间30分钟左右。 （四）粘合剂 1.铬矾明胶液铬矾（或甲铬矾）0.5g，明矾5g，蒸馏水1000ml