基因产物 β-内酰胺酶活性增加 37 倍左右,但 Fn 急剧下降。此外,利用 λ 噬菌体 PL 启动子的温度敏感性,采用二级连续培养方式,第 1 罐于低温下培养以降低表达效 率,第 2 罐高温培养,对提高表达效率亦是有效的。 此外,当质粒拷贝数与某些化合物有关时,亦可采取添加或去除相应化合物的 双阶段连续过滤培养法以提高拷贝数和表达效率。如用含有在色氨酸启动子下游接 有 β-半乳糖苷酶基因的重组质粒 pMCT98 的基因工程菌进行单级连续培养,并结合 0.2μm 孔径陶瓷过滤器装置(图 7-22),开始培养液含色氨酸,表达效率低,当生长 浊度达到 10 时,进行交叉流动过滤,且供给不含色氨酸料液,结果如图 7-23 所示。 过滤达 15min 后培养液中已测不出色氨酸,表达效率增加,β-半乳糖苷酶活力剧增。 最终浊度达 150(相当于含 6%干细胞),β 半乳糖苷酶约占总蛋白量 8%。 由此可知,在基因工程细胞培养工程中,需根据其固有特点和具体情况,采取 相应措施、提高质粒稳定性,增加质粒拷贝数,实现培养条件优化,提高表达效率