(教案续页) 辅助手段和 基本内容 时间分配 概述 分子生物学是一门从分子水平研究生命现象、生命的本质、生命活动及其规律 的科学。 第一节、转染技术 (一)医学分子生物学的基本概念 医学分子生物学是分子生物学的一个重要分支，是从分子水平研究人体在 正常和疾病状态下生命活动及其规律的一门科学。 医学分子生物学主要研究人体生物大分子（基因，蛋白质）和大分子体系 的结构、功能、相互作用及其同疾病发生、发展的关系。 与生殖相关的分子生物学技术主要包括转染技术、PCR技术、RNA干扰技 术、DNA序列分析技术、Souther印迹技术、Northem印迹技术、Westem印 迹技术、免疫组织化学技术等。 (二)转染技术的基本概念 转染技术是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术，它是研究 基因表达调控，突变分析等的常规工具。 转染途径主要包括以下几种： 冬物理介导：电穿孔法、显微注射、基因枪 冬化学介导：磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法 冬生物介导：原生质体转染、病毒介导的转染 (三)各种转染方法的原理与特点 1、电穿孔法 电穿孔靠脉冲电流在细胞膜上打孔而将核酸导入细胞内。 本法需用特殊仪器（电穿孔仪），把悬浮状态的受体细胞和供体DNA共同放入皿 中，再施以高压电脉冲，能够促进DNA通过细胞膜而进入细胞内， 并可整合到细胞的DNA中，使细胞发生转化。 优点：转染效率较高 冬缺点： >需要昂贵的仪器（电穿孔仪）。 >对细胞的损伤较大，每次转染需要更多的细胞和DNA。 每种细胞电转的条件都需要进行多次优化。（教案续页） 基 本 内 容 辅助手段和 时间分配 概述 分子生物学是一门从分子水平研究生命现象、生命的本质、生命活动及其规律 的科学。 第一节、转染技术 （一） 医学分子生物学的基本概念 医学分子生物学是分子生物学的一个重要分支，是从分子水平研究人体在 正常和疾病状态下生命活动及其规律的一门科学。 医学分子生物学主要研究人体生物大分子（基因，蛋白质）和大分子体系 的结构、功能、相互作用及其同疾病发生、发展的关系。 与生殖相关的分子生物学技术主要包括转染技术、PCR 技术、RNA 干扰技 术、DNA 序列分析技术、Souther 印迹技术、Northern 印迹技术、Western 印 迹技术、免疫组织化学技术等。 （二） 转染技术的基本概念 转染技术是指将外源分子如 DNA，RNA 等导入真核细胞的技术，它是研究 基因表达调控，突变分析等的常规工具。 转染途径主要包括以下几种： ❖ 物理介导：电穿孔法、显微注射、基因枪 ❖ 化学介导：磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法 ❖ 生物介导：原生质体转染 、病毒介导的转染 （三） 各种转染方法的原理与特点 1、 电穿孔法 电穿孔靠脉冲电流在细胞膜上打孔而将核酸导入细胞内。 本法需用特殊仪器（电穿孔仪），把悬浮状态的受体细胞和供体 DNA 共同放入皿 中，再施以高压电脉冲，能够促进 DNA 通过细胞膜而进入细胞内， 并可整合到细胞的 DNA 中，使细胞发生转化。 ❖ 优点：转染效率较高 ❖ 缺点： ➢ 需要昂贵的仪器 （电穿孔仪）。 ➢ 对细胞的损伤较大，每次转染需要更多的细胞和 DNA。 ➢ 每种细胞电转的条件都需要进行多次优化