(⑦)色剂:0.1%茚三酮一丙酮溶液(取0.lg茚三酮溶于100mL无水丙酮,贮于棕色瓶 中待用。) 图141纸上层析点样图 四、操作步骤: (1)取滤纸二张(12cm×12cm),按图要求画好平行线和样点并在样点上标号。 (2)点样用毛细管依次点上氨基酸标准样液和混合液于样点并记录各样点所点的氨 基酸。点样时一定要注意:第一,样点直径控制在3mm以内:第二,每样点需重复点3次 但每次需经干燥后方可再点,为了快速干燥,可用电吹风在较低档温度下风干。点好样的滤 纸卷成筒状,用透明胶纸黏接,要注意在卷纸筒时,两纸不能搭接。 (3)展层在层析缸内放好展层剂甲,(展层剂液面高度约1cm),将一张点好 样的滤纸小心地移入层析缸,点样端浸入展层剂甲中,要特别注意不要使样点浸入展层 剂。盖好层析缸。当看到展层剂到达画定的溶剂前沿线时,取出滤纸,用较低档温度电吹风 吹干。同时将另一张点好样的纸照上法放入层析,此纸只此一次单向层析。 将吹干的滤纸转90°,再卷筒状,用透明胶固定,放入另一个放置有展层剂 乙的层析缸内展层。展层完毕吹干。此纸则为双向层析 (4)显色将上述单向层析和双向层析的滤纸经吹干后用喷雾器把茚三酮溶液均匀地 喷在纸上(不要喷的太多),取下纸,放入65℃烘箱中显色数分钟,或用电吹风热风吹干显 色亦可 (5)计算各氨基酸的Rr 五、思考题 (1)你是怎样理解本实验为什么要设计单向层析和双向层析的 (2)本实验做单向层析时是使用展层剂甲,是否可以用展层剂乙,为什么? (3)计算各R,并说明混合氨基酸溶液中含有一些什么氨基酸? 实验五蛋白质的等电点测定 实验目的和要求 (1)初步学会测定蛋白质等电点的基本方法 (2)了解蛋白质的两性解离性质 二、实验原理: 蛋白质分子中有一定数量的自由氨基和自由羧基存在(以及一些其他酸性和碱性基(7) 色剂：0.1%茚三酮－丙酮溶液 (取 0.1g 茚三酮溶于 100mL 无水丙酮，贮于棕色瓶 中待用。) 四、操作步骤： (1) 取滤纸二张 (12cm×12cm)，按图要求画好平行线和样点并在样点上标号。 (2) 点样 用毛细管依次点上氨基酸标准样液和混合液于样点并记录各样点所点的氨 基酸。点样时一定要注意：第一，样点直径控制在 3mm 以内；第二，每样点需重复点 3 次， 但每次需经干燥后方可再点，为了快速干燥，可用电吹风在较低档温度下风干。点好样的滤 纸卷成筒状，用透明胶纸黏接，要注意在卷纸筒时，两纸不能搭接。 (3) 展层 在层析缸内放好展层剂甲，(展层剂液面高度约 1cm)，将一张点好 样的滤纸小心地移入层析缸，点样端浸入展层剂甲中，要特别注意不要使样点浸入展层 剂。盖好层析缸。当看到展层剂到达画定的溶剂前沿线时，取出滤纸，用较低档温度电吹风 吹干。同时将另一张点好样的纸照上法放入层析，此纸只此一次单向层析。 将吹干的滤纸转 90°，再卷筒状，用透明胶固定，放入另一个放置有展层剂 乙的层析缸内展层。展层完毕吹干。此纸则为双向层析。 (4) 显色 将上述单向层析和双向层析的滤纸经吹干后用喷雾器把茚三酮溶液均匀地 喷在纸上(不要喷的太多)，取下纸，放入 65℃烘箱中显色数分钟，或用电吹风热风吹干显 色亦可。 (5) 计算各氨基酸的 Rf。 五、思考题： (1) 你是怎样理解本实验为什么要设计单向层析和双向层析的？ (2) 本实验做单向层析时是使用展层剂甲，是否可以用展层剂乙，为什么？ (3) 计算各 Rf，并说明混合氨基酸溶液中含有一些什么氨基酸？ 实验五 蛋白质的等电点测定 一、实验目的和要求： (1) 初步学会测定蛋白质等电点的基本方法。 (2) 了解蛋白质的两性解离性质。 二、实验原理： 蛋白质分子中有一定数量的自由氨基和自由羧基存在(以及一些其他酸性和碱性基