团),是两性电解质。作为带电颗粒它可以在电场中移动,移动方向取决于蛋白质分子所带 的电荷。蛋白质颗粒在溶液中所带的电荷,既取决于其分子组成中碱性和酸性氨基酸的含量 又受所处溶液的pH影响。当蛋白质溶液处于某一p时,蛋白质游离成正、负离子的趋势相 等,即成为兼性离子( zwitterion,净电荷为0),此时溶液的pH值称为蛋白质的等电点 ( isoelectric point,简写pI)。处于等电点的蛋白质颗粒,在电场中并不移动。蛋白质溶 液的p大于等电点,该蛋白质颗粒带负电荷,反之则带正电荷。不同蛋白质,等电点不同 在等电点时,蛋白质溶解度最小,容易沉淀析出。因此,可以借助在不同p溶液中的某蛋 白质的溶解度来测定该蛋白质的等电点。 三、试剂与器材 (1)试管及试管架。 (2)吸管与滴管 (3)100mL容量瓶和25mL锥形瓶 (4)水浴锅和温度计。 (5)1.00mol/L醋酸。 (6)0.1mol/L醋酸。 (7)1mol/L醋酸 (8)蒸馏水。 (9)5%酪蛋白醋酸钠溶液:将酪蛋白充分研磨后称量0.5g于250mL锥形瓶中,加入10mL l.00mol/L醋酸钠溶液,将锥形瓶置于50℃左右水浴,并小心转动,使酪蛋白充分溶解。然 后将瓶内酪蛋白溶液转移到100m容量瓶中,加蒸馏水至刻度。 四、操作步骤: (1)取五支同种规格的试管,编号,按表4-1顺序精确加入各种试剂,然后逐一振荡 试管,并使试管混合均匀。 (2)将上述试管静置于试管架上约15分钟后,仔细观察,比较各管的浑浊度,将观察的 结果记载于表内,并指出酪蛋白的等电点。 注:①本实验各种试剂的浓度及用量均要求很准确 ②浑浊度可用一、+、++、+++等符号表示。 表4-1蛋白质的等电点测定表 管/蒸|1.00m01 000|.00o.%酪蛋溶液浑浊度 水醋酸/m|醋酸/m醋酸/m|白溶液/mp 8.4 0.6 1.0 5.9 8.7 0.3 1.0 5.3 9.0 1.6 0 五、思考题 (1)什么叫等电点?在等电点时,蛋白质为什么容易被沉淀析出? (2)当实验结果与已知发生较大误差时,试分析其原因团)，是两性电解质。作为带电颗粒它可以在电场中移动，移动方向取决于蛋白质分子所带 的电荷。蛋白质颗粒在溶液中所带的电荷，既取决于其分子组成中碱性和酸性氨基酸的含量， 又受所处溶液的 pH 影响。当蛋白质溶液处于某一 pH 时，蛋白质游离成正、负离子的趋势相 等，即成为兼性离子(zwitterion,净电荷为 O)，此时溶液的 pH 值称为蛋白质的等电点 (isoelectric point,简写 pI)。处于等电点的蛋白质颗粒，在电场中并不移动。蛋白质溶 液的 pH 大于等电点，该蛋白质颗粒带负电荷，反之则带正电荷。不同蛋白质，等电点不同。 在等电点时，蛋白质溶解度最小，容易沉淀析出。因此，可以借助在不同 pH 溶液中的某蛋 白质的溶解度来测定该蛋白质的等电点。 三、试剂与器材： (1) 试管及试管架。 (2) 吸管与滴管。 (3) 100mL 容量瓶和 25mL 锥形瓶。 (4) 水浴锅和温度计。 (5) 1.00mol/L 醋酸。 (6) 0.1mol/L 醋酸。 (7) 1mol/L 醋酸。 (8) 蒸馏水。 (9) 5%酪蛋白醋酸钠溶液：将酪蛋白充分研磨后称量 0.5g 于 250mL 锥形瓶中，加入 10mL 1.00mol/L 醋酸钠溶液，将锥形瓶置于 50℃左右水浴，并小心转动，使酪蛋白充分溶解。然 后将瓶内酪蛋白溶液转移到 100mL 容量瓶中，加蒸馏水至刻度。 四、操作步骤： (1) 取五支同种规格的试管，编号，按表 4－1 顺序精确加入各种试剂，然后逐一振荡 试管，并使试管混合均匀。 (2)将上述试管静置于试管架上约 15 分钟后，仔细观察，比较各管的浑浊度，将观察的 结果记载于表内，并指出酪蛋白的等电点。 注：①本实验各种试剂的浓度及用量均要求很准确。 ②浑浊度可用－、＋、＋＋、＋＋＋等符号表示。 表 4－1 蛋白质的等电点测定表 试 管 号 蒸馏 水 1.00mol/L 醋酸/mL 1.00mol/L 醋酸/mL 1.00mol/L 醋酸/mL 0.1%酪蛋 白溶液/mL 溶液 pH 浑浊度 1 8.4 0.6 1.0 5.9 2 8.7 0.3 1.0 5.3 3 8.0 1.0 1.0 4.7 4 9.0 1.0 4.1 5 7.4 1.6 1.0 3.5 五、思考题： (1) 什么叫等电点？在等电点时，蛋白质为什么容易被沉淀析出？ (2) 当实验结果与已知发生较大误差时，试分析其原因