豚鼠肝脏植物组织鱼组织 微生物组织 离心 第二次离心层析 离子交 过滤转谷氨酰胶酶 透析 转谷氨酰胺酶离子交换 ( Falcone等人,199)层析 季铵乙基一交联 ( Gerber等人199凝胶过滤 葡聚糖,离子交换 透析 层析 转谷氨酰胺酶 羟基磷灰石 (Ando等人1989) 转谷氨酰胺酶 等人1994) 亲和力层析 转谷氨酰胺酶 Brookhart等人,1983) 图7-1-2来源不同的TG的生产过程 (二)微生物发酵法生产谷氨酰胺转胺酶 1989年,Ando和 Motoki等人报道了用微生物发酵法生产出TG。他们筛选了5000株菌 株,经过大量实验与分析发现 Streptoverticillium griseocaneun,S. cInnamonen和S. mobargense 能够分泌这种酶。生产τG的发酵过程在原理上和通常的微生物发酵法一样,以葡萄糖、蔗 糖、淀粉等为碳源,以无机或有机氮为氮源:辅之以适量的矿物质与微量元素及非离子型 表面活性剂。整个发酵过程为好氧发酵,因此必须通氧并进行适当的搅拌。微生物生长和 产物形成的温度在25~35℃之间,发酵时间则由培养条件及TG达到的最高酶活所决定, 般在2~4 do ando和 Motoki等人生产MIG的过程是:先将微生物接种在100mL培养基中 pH7.0,30℃下培养48h,然后将种子液接入20L的新鲜发酵培养基中,通气量为10Lmin 转速为250r/min,30℃下培养3d,发酵液酶活可达到0.28~250u/mL。吴解温等人筛选 出菌株S. ladakanun,在25~28℃,100~150r/min的培养条件下,接入103~104 cfu/mL的 种子,培养4d后,MIG酶活达到最高。若加入2mg/的抗生素 Colistin,则产率可以提高 30%,MIG酶活达到2.1umL。除了上面介绍的两种方法外, Washizu等人和 Takehana等人 还利用基因克隆的方法生产出TG。用这种方法生产的TG,在分子量大小和免疫性方面与 MIG相似,但其酶活较低 (三MIG的分离纯化 MIG是一种胞外酶,因此,分离纯化工艺与其它胞外酶的提取过程相似。发酵结束 后,先对发酵液进行离心分离,除去菌体,然后对上清液进行处理,则可得到酶制剂产品 应用于其它酶处理过程的技术,如离子交换、色谱、纸层析、超滤等也可用于TG的处理纯 化4 豚鼠肝脏 均化 离心 第二次离心 过滤 季铵乙基-交联 葡聚糖,离子交换 羟基磷灰石 吸咐 亲和力层析 转谷氨酰胺酶 (Brokhart 等人,1983) 植物组织 抽提 离心 层析 (Falcone 等人,1993) 鱼组织 均化 离心 过滤 层析 转谷氨酰胺酶 透析 层析 透析 层析 转谷氨酰胺酶 (Yasueda 等人1994) 微生物组织 发酵 离心 离子交换 超滤 凝胶过滤 离子交换 转谷氨酰胺酶 (Ando 等人1989) (Gerber等人1994) 转谷氨酰胺酶 过滤 过滤 图7-1-2 来源不同的TG的生产过程 (二)微生物发酵法生产谷氨酰胺转胺酶 1989年，Ando和Motoki等人报道了用微生物发酵法生产出TG。他们筛选了5000株菌 株，经过大量实验与分析发现Streptoverticillium griseocaneun，S. cinnamonen和S. mobaraense 能够分泌这种酶。生产TG的发酵过程在原理上和通常的微生物发酵法一样，以葡萄糖、蔗 糖、淀粉等为碳源，以无机或有机氮为氮源；辅之以适量的矿物质与微量元素及非离子型 表面活性剂。整个发酵过程为好氧发酵，因此必须通氧并进行适当的搅拌。微生物生长和 产物形成的温度在25～35℃之间，发酵时间则由培养条件及TG达到的最高酶活所决定，一 般在2～4 d。Ando和Motoki等人生产MTG的过程是∶先将微生物接种在100 mL 培养基中， pH 7.0，30 ℃下培养48 h，然后将种子液接入20 L的新鲜发酵培养基中，通气量为10 L/min， 转速为250 r/min，30℃下培养3 d，发酵液酶活可达到 0.28～2.50 u/mL。吴解温等人筛选 出菌株S. ladakanum，在25～28℃，100～150 r/min的培养条件下，接入103～104 cfu/mL 的 种子，培养4 d后，MTG酶活达到最高。若加入2 mg/L的抗生素Colistin，则产率可以提高 30%，MTG酶活达到2.1 u/mL。除了上面介绍的两种方法外，Washizu等人和Takehana等人 还利用基因克隆的方法生产出TG。用这种方法生产的TG，在分子量大小和免疫性方面与 MTG相似，但其酶活较低。 (三)MTG 的分离纯化 MTG是一种胞外酶，因此，分离纯化工艺与其它胞外酶的提取过程相似。发酵结束 后，先对发酵液进行离心分离，除去菌体，然后对上清液进行处理，则可得到酶制剂产品。 应用于其它酶处理过程的技术，如离子交换、色谱、纸层析、超滤等也可用于TG的处理纯 化