结合的标记物被固定在载体上，而游离的标记物留于溶液中。这样可以通过洗涤将游离的仙※除去， 结合标记物的测定可在固相上进行。 6。酶免疫测定 酶免疫测定(enzyme immunoassay)可分为均相(homogenous)和非均相(heterogenous)两种类 型。在均相EA中可不需进行游离的和结合的标记物的分离而直接测定标记物。例如在某种条件下， 抗原抗体反应后形成的酶标记抗原抗体复合物中的酶失去其对底物作用的活力，因而测出的酶活力 直接反映游离的酶标记物。均相EIA在临床检验中较少应用。非均相EIA需先进行游离的和结合的 标记物的分离。如前所述，固相载体可用作一种分离手段。这种固相酶免疫测定方法在1971年最初 建立时称为酶联免疫吸附剂测定(enzyme1 inked immunosorbent assay),简称ELISA,在国内有 译作酶联免疫吸附试验的，虽然含义不完全确切，但已习用 生物谷技术讲座：ELISA原理与分类 1.ELISA的原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍 保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检 标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上 形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合 在固相载体上。此时固相上的醇量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底 物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定 性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏 感度。 2.ELISA的类型 L,IS可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂：(1)固相的抗 菌素原或抗体，即“免疫吸附剂”(imnosorbent)片(2)酶标记的抗原或抗体，称为“结合物 (conjugate):(3)酶反应的底物。根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出 各种不同类型的检测方法。用于临床检验的LISA主要有以下几种类型： 2.2.1双抗体夹心法测抗原 双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下： 1)将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质 2)加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合，形成周相抗原抗体复合物。洗涤除去结合的标记物被固定在载体上，而游离的标记物留于溶液中。这样可以通过洗涤将游离的 Ab※除去， 结合标记物的测定可在固相上进行。 6． 酶免疫测定 酶免疫测定（enzyme immunoassay）可分为均相（homogenous）和非均相（heterogenous）两种类 型。在均相 EIA 中可不需进行游离的和结合的标记物的分离而直接测定标记物。例如在某种条件下， 抗原抗体反应后形成的酶标记抗原抗体复合物中的酶失去其对底物作用的活力，因而测出的酶活力 直接反映游离的酶标记物。均相 EIA 在临床检验中较少应用。非均相 EIA 需先进行游离的和结合的 标记物的分离。如前所述，固相载体可用作一种分离手段。这种固相酶免疫测定方法在 1971 年最初 建立时称为酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay），简称 ELISA，在国内有 译作酶联免疫吸附试验的，虽然含义不完全确切，但已习用 生物谷技术讲座：ELISA 原理与分类 1. ELISA 的原理 ELISA 的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍 保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检 标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上 形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合 在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底 物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定 性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏 感度。 2. ELISA 的类型 ELISA 可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂：（1）固相的抗 菌素原或抗体，即"免疫吸附剂"（immunosorbent）；（2）酶标记的抗原或抗体，称为"结合物" （conjugate）；（3）酶反应的底物。根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出 各种不同类型的检测方法。用于临床检验的 ELISA 主要有以下几种类型： 2.2.1 双抗体夹心法测抗原 双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下： 1） 将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。 2） 加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去