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a-hCG和抗B-hCG两种抗体,抗a-hCG抗体将与LH中的 a酶位发生交叉反应。在临床检验中,如用抗hCc抗血清作为妊娠诊断试剂检定尿液中hCG,只能 用于CG浓度较高的试验,否则妇女生理性排泄入尿液中的微量H将与之发生交叉反应。因此在作 为早孕诊断(敏感度应达到5OmIu/mlh0G)的实际中必须应用只对hCG特异的抗B-hCG,以避免与 其它激素的交叉反应的发生。 1.3.4敏感性 在测定血清中某一物质的含量时,化学比色法的敏感度为g/l水平,酶反应测定法的敏感度约为 510μg/m1,免疫测定中凝胶扩散法和浊度法的敏感度与酶反应法相仿。标记的免疫测定的敏感度 可提高数千倍,达ng/l水平。例如,用放射免疫测定法或酶免疫测定法测定HBsAg,其敏感度可 达0.1ng/ml。 1.4免疫测定在临床检验中的应用 由于各种抗原成份,包括小分子的半抗原,均可用以制备特异性的抗血清或单克隆抗体,利用此抗 体作为试剂就可检测标本中相应的抗原,因此免疫测定的应用范围极广,在临床检验中可用于测定: 1)体液中的各种蛋白质,包括含量极少的蛋白质如甲胎蛋白等。 2)激素,包括小分子量的笛体激素等 3)抗生素和药物。 4)病原体抗原,HBsAg、HBeAg等。 5)另外,也可利用纯化的抗原检测标本中的抗体,例如抗-Bs等。 5.标记的免疫测定 如上所述,免疫测定是一种很敏感的测定方法,抗原抗体反应后直接测定形成的沉淀或浊度,敏感 度可达510μg/ml,但在临床检验中,某些待测物在标本中的含量远低于这一水平,因此要寻找增 加敏感度的方法。标记的免疫测定是将检测试剂中的抗原或抗体用可微量测定的物质加以标记,通 过测定标记物来提高敏感度。在放射免疫测定和醇免疫测定中,标记物分别为放射性核素和酶,最 后用测定放射性和酶活力来计算待检物的量,敏感度可比直接测定沉淀物提高数百至数千倍。在标 记免疫测定中,一般加入过量的标记试剂以保证与待测物彻底反应。以标记抗体(b※)检测抗原 (Ag)为例,反应式如下: Ag+Ab※·AgAb※+Ab※ 在反应产物中有与Ag结合的Ab※和游离和Ab※,如不将两者分离而测定标记物,测得的结果将为 两者之和。因此,游离标记物与结合标记物的分离是标记免疫测定中的重要步骤。可采用多种手段, 固相载体是其中之一。如将抗原或抗体包被在固相载体上,然后再与标记的抗原或抗体直接反应, α-hCG 和抗 β-hCG 两种抗体,抗 α-hCG 抗体将与 LH 中的 α酶位发生交叉反应。在临床检验中,如用抗 hCG 抗血清作为妊娠诊断试剂检定尿液中 hCG,只能 用于 hCG 浓度较高的试验,否则妇女生理性排泄入尿液中的微量 LH 将与之发生交叉反应。因此在作 为早孕诊断(敏感度应达到 50mIu/mlhCG)的实际中必须应用只对 hCG 特异的抗 β-hCG,以避免与 其它激素的交叉反应的发生。 1.3.4 敏感性 在测定血清中某一物质的含量时,化学比色法的敏感度为 mg/ml 水平,酶反应测定法的敏感度约为 5~10μg/ml,免疫测定中凝胶扩散法和浊度法的敏感度与酶反应法相仿。标记的免疫测定的敏感度 可提高数千倍,达 ng/ml 水平。例如,用放射免疫测定法或酶免疫测定法测定 HBsAg,其敏感度可 达 0.1ng/ml。 1.4 免疫测定在临床检验中的应用 由于各种抗原成份,包括小分子的半抗原,均可用以制备特异性的抗血清或单克隆抗体,利用此抗 体作为试剂就可检测标本中相应的抗原,因此免疫测定的应用范围极广,在临床检验中可用于测定: 1) 体液中的各种蛋白质,包括含量极少的蛋白质如甲胎蛋白等。 2) 激素,包括小分子量的甾体激素等。 3) 抗生素和药物。 4) 病原体抗原,HBsAg、HBeAg 等。 5) 另外,也可利用纯化的抗原检测标本中的抗体,例如抗-HBs 等。 5. 标记的免疫测定 如上所述,免疫测定是一种很敏感的测定方法,抗原抗体反应后直接测定形成的沉淀或浊度,敏感 度可达 5~10μg/ml,但在临床检验中,某些待测物在标本中的含量远低于这一水平,因此要寻找增 加敏感度的方法。标记的免疫测定是将检测试剂中的抗原或抗体用可微量测定的物质加以标记,通 过测定标记物来提高敏感度。在放射免疫测定和酶免疫测定中,标记物分别为放射性核素和酶,最 后用测定放射性和酶活力来计算待检物的量,敏感度可比直接测定沉淀物提高数百至数千倍。在标 记免疫测定中,一般加入过量的标记试剂以保证与待测物彻底反应。以标记抗体(Ab※)检测抗原 (Ag)为例,反应式如下: Ag+ Ab※ → AgAb※+ Ab※ 在反应产物中有与 Ag 结合的 Ab※和游离和 Ab※,如不将两者分离而测定标记物,测得的结果将为 两者之和。因此,游离标记物与结合标记物的分离是标记免疫测定中的重要步骤。可采用多种手段, 固相载体是其中之一。如将抗原或抗体包被在固相载体上,然后再与标记的抗原或抗体直接反应
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