b)水中细菌总数的测定 一、目的要求 学习掌握平板茵落计数的原理和方法。 二、实验材料 菌液：大肠杆菌南悬液 培养基：营养琼脂培养基，无菌生理盐水 3.1ml、10ml无菌移液管，无茵培养皿等 三、基本原理 平板菌落计数法是根据在固体培养基上形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的肉 眼可见的子细胞群体这一微生物的培养特征而设计的一种计数方法。将样品进行不同稀释。 使微生物分 散开 以单细胞存在。再 量的稀释液涂布于平板上，培养后， 每一个活细 即能形成一个菌落。统计菌落的数目，根据稀释的倍数及取样接种量即可换算出样品中的含 菌数。现在倾向用菌落形成单位(colony-forming units,cfu)来表示样品的活菌含量。平板 菌落计数法可用于测定单细胞或单孢子微生物菌液的浓度，成品检验和水质检查。 四、操作步骤 ! 编号 取无菌培养皿9套，每3套为一组，在每组皿底分别写上10 10 文无南管理列于管果上，传次标明o,向管中客义：另是 闲生理盐水。 2.稀释：用1ml无菌吸管精确地吸取1ml己充分混匀的菌悬液，注入101试管中（注意吸 管不要碰到水面)。然后另取1支无菌吸管，于10试管中来回吹吸三次，使之混匀， 即成10稀释液。再从10试管中吸1ml注入102试管中，重复上述操作，直至制成10 稀释液 3.取样：用三支1ml无菌吸管分别吸取101、102和103稀释液各1ml,对号放入编好号的 无南培养皿中。 4.倾注平板：尽快向上述盛有不同稀释度菌液的平皿中倒入融化后冷却至45℃左右的营养 琼脂培养基，每皿约15ml,置水平位置迅速旋转平皿，使培养基与菌液混合均匀，而又 不使培养基荡出或溅到皿盖上， 培养：待培养基凝固后，倒置于37℃恒温培养箱中培养24h。 6.计数：数各皿中菌落数，算出同一稀释度三个平皿上菌落平均数，按下述报告计算结果。 菌落数报告原则： 1)洗择平均菌落数在30300之间的稀释度，乘以稀释倍数 2)若有两个稀释度的菌落数均在30-300之间，则应视二者菌数之比值如何。如果比值小 于2.0，应报告其平均数：如果比值大于2.0，则报告其中较小的数字。 3)如所有稀释度的菌落数均大于300，则应以稀释度最高的平均菌落数计算。 4)如所有稀释度的菌落数均小于30，则应以稀释度最低的平均数菌落计算。 5)如果所有稀释度的菌落数均不在30300之间，其中一部分大于300，一部分小于30 则应以最接折30或300的平均菌落数计算。 6)菌落总数在100以内，按实有数报告 大于100时，采用两位有效数字，后面的数字四 舍五入处理，为了缩短数字的长度，可用10的指数来表示。b) 水中细菌总数的测定 一、目的要求 学习掌握平板菌落计数的原理和方法。 二、实验材料 1. 菌液：大肠杆菌菌悬液 2. 培养基：营养琼脂培养基，无菌生理盐水 3. 1ml、10ml 无菌移液管，无菌培养皿等 三、基本原理 平板菌落计数法是根据在固体培养基上形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的肉 眼可见的子细胞群体这一微生物的培养特征而设计的一种计数方法。将样品进行不同稀释， 使微生物分散并以单细胞存在。再用一定量的稀释液涂布于平板上，培养后，每一个活细胞 即能形成一个菌落。统计菌落的数目，根据稀释的倍数及取样接种量即可换算出样品中的含 菌数。现在倾向用菌落形成单位（colony-forming units，cfu）来表示样品的活菌含量。平板 菌落计数法可用于测定单细胞或单孢子微生物菌液的浓度，成品检验和水质检查。 四、操作步骤 1. 编号：取无菌培养皿 9 套，每 3 套为一组，在每组皿底分别写上 10-1、10-2、10-3。另取 3 支无菌空试管排列于试管架上，依次标明 10-1、10-2、10-3，并向试管中各加入 9ml 无 菌生理盐水。 2. 稀释：用 1ml 无菌吸管精确地吸取 1ml 已充分混匀的菌悬液，注入 10-1 试管中（注意吸 管不要碰到水面）。然后另取 1 支无菌吸管，于 10-1 试管中来回吹吸三次，使之混匀， 即成 10-1 稀释液。再从 10-1 试管中吸 1ml 注入 10-2 试管中，重复上述操作，直至制成 10-3 稀释液。 3. 取样：用三支 1ml 无菌吸管分别吸取 10-1、10-2和 10-3 稀释液各 1ml，对号放入编好号的 无菌培养皿中。 4. 倾注平板：尽快向上述盛有不同稀释度菌液的平皿中倒入融化后冷却至 45℃左右的营养 琼脂培养基，每皿约 15ml，置水平位置迅速旋转平皿，使培养基与菌液混合均匀，而又 不使培养基荡出或溅到皿盖上。 5. 培养：待培养基凝固后，倒置于 37℃恒温培养箱中培养 24h。 6. 计数：数各皿中菌落数，算出同一稀释度三个平皿上菌落平均数，按下述报告计算结果。 菌落数报告原则： 1） 选择平均菌落数在 30~300 之间的稀释度，乘以稀释倍数。 2） 若有两个稀释度的菌落数均在 30~300 之间，则应视二者菌数之比值如何。如果比值小 于 2.0，应报告其平均数；如果比值大于 2.0，则报告其中较小的数字。 3） 如所有稀释度的菌落数均大于 300，则应以稀释度最高的平均菌落数计算。 4） 如所有稀释度的菌落数均小于 30，则应以稀释度最低的平均数菌落计算。 5） 如果所有稀释度的菌落数均不在 30~300 之间，其中一部分大于 300，一部分小于 30， 则应以最接近 30 或 300 的平均菌落数计算。 6） 菌落总数在 100 以内，按实有数报告，大于 100 时，采用两位有效数字，后面的数字四 舍五入处理，为了缩短数字的长度，可用 10 的指数来表示