原理 采用性能优良的DNA聚合酶PfuTurbo DNA polymerase,设计出含有突变位点的一对对应的引物，将含 有目的基因的载体加热解链，退火时，突变引物会结合到 载体插入片段的相应序列上，并以此作为引物，延伸。该 方法可以直接完成数千bp长度的含有插入片段的整个载 体的复制，使复制的DNA含有突变位点。PCR后，PCR 产物用DpnI消化原先的模版，这是因为大多来自于大肠 杆菌的DNA是甲基化的，对DpnI敏感，而新延伸的DNA 链则不然。消化后，所消化的质粒未突变链含有大量的切 口，在转化大肠杆菌后，大肠杆菌会依据突变链将切口修 补完善，并予以复制。从而完成基因的点突变。由于该技 术仅使用一次PCR循环，所以被称为一步法点突变PCR