实验四ISTA小麦种子醇溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴 定品种纯度 一、目的要求 通过本实验，了解种子醇溶蛋白酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定品种的原理，掌握具体电 泳方法，明了该方法的先进性和实用性。 二、原理 从种子中提取出来的小麦和大麦籽粒的醇溶蛋白，可用H值3.2的聚丙烯酰胺凝胶电 泳PAGE)进行分离。其电泳所出现的蛋白质谱带类型，与同品种的遗传组成有关，并可作为 品种的指纹“(fingerprint).即为鉴定品种的生化性状。因此，就可利用这种品种指纹" 来鉴定未知品种的真实性，以及分析单粒种子个体的“指纹“来测定品种的纯度。 三、仪器和试剂 1.仪器 (1)电泳仪可用北京六一仪器厂制造的DY一型电泳仪（电压范围1-600），或用江 苏丹阳无线电一厂生产的SCR-4型高压电泳仪（电压范围1~1500V)。 (2)电泳槽可用北京六一仪器厂生产的六一牌夹心式垂直电泳槽，其样品梳为11~12 个齿，也可用1▣厚度的有机玻璃板或橡胶板自制成15-16个齿的样品梳。 (3)离心机可用上海安亭科学仪器厂生产的TGL-16B型高速台式离心机，其最高转速 为16000r/in,定时器定时1-20min。 (4)离心管必须用与离心机配套使用的离心管。通常用1L。的聚丙烯塑料离心管， 以用作样品提取的容器。 (⑤)天平1/1000的电子天平或分析天平。 (⑥)样品钳这是用于夹碎种子的工具，可用轻便老虎钳代替。 ()其他物品还需有存放有关试剂的广口瓶、移液管及移液管架、移液球或吸耳球、 滴瓶、微量进样器(1~50L。)、注射器等电泳用品 2.试剂 所有使用的化学试剂都需是分析级或更好的等级。 丙烯酰胺(AC)、亚甲基丙烯酰胺(Bis)、尿素、冰酯酸、甘氨酸、硫酸亚铁、抗坏血酸 过氧化氢、2-巯基乙醇、甲基绿、三氯醋酸、乙醇、2-氯乙醇、考马斯亮蓝250或G250。 实验四 ISTA 小麦种子醇溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴 定品种纯度 一、目的要求 通过本实验，了解种子醇溶蛋白酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定品种的原理，掌握具体电 泳方法，明了该方法的先进性和实用性。 二、原理 从种子中提取出来的小麦和大麦籽粒的醇溶蛋白，可用 pH 值 3．2 的聚丙烯酰胺凝胶电 泳(PAGE)进行分离。其电泳所出现的蛋白质谱带类型，与同品种的遗传组成有关，并可作为 品种的“指纹”(fingerprint)。即为鉴定品种的生化性状。因此，就可利用这种“品种指纹” 来鉴定未知品种的真实性，以及分析单粒种子个体的“指纹”来测定品种的纯度。 三、仪器和试剂 1．仪器 (1)电泳仪 可用北京六一仪器厂制造的 DYY 一Ⅲ型电泳仪(电压范围 1—600V)，或用江 苏丹阳无线电一厂生产的 SCR—4 型高压电泳仪(电压范围 l～1500V)。 (2)电泳槽 可用北京六一仪器厂生产的六一牌夹心式垂直电泳槽，其样品梳为 11～12 个齿，也可用 l mm 厚度的有机玻璃板或橡胶板自制成 15-16 个齿的样品梳。 (3)离心机 可用上海安亭科学仪器厂生产的 TGL—16B 型高速台式离心机，其最高转速 为 16 000r／min，定时器定时 1—20 min。 (4)离心管 必须用与离心机配套使用的离心管。通常用 1 mL。的聚丙烯塑料离心管， 以用作样品提取的容器。 (5)天平 1／1 000 的电子天平或分析天平。 (6)样品钳 这是用于夹碎种子的工具，可用轻便老虎钳代替。 (7)其他物品 还需有存放有关试剂的广口瓶、移液管及移液管架、移液球或吸耳球、 滴瓶、微量进样器(1～50L。)、注射器等电泳用品。 2．试剂 所有使用的化学试剂都需是分析级或更好的等级。 丙烯酰胺(Acr)、亚甲基丙烯酰胺(Bis)、尿素、冰醋酸、甘氨酸、硫酸亚铁、抗坏血酸、 过氧化氢、2—巯基乙醇、甲基绿、三氯醋酸、乙醇、2—氯乙醇、考马斯亮蓝 R250 或 G250