四、溶液的配制 1.提取液 (1)小麦提取液(100mL),称取甲基绿粉剂0.05g,加入25ml2-氯乙醇，再加入无离 子水，定容至100ml,低温保存。 (2)大麦提取液(100mL)称取甲基绿粉剂0.05g,加入20ml2-氯乙醇加人18g尿 素，再加入1ml2-蔬基乙醇，然后加入无离子水，定容至100mL,低温保存。 2.电极缓冲原液(500mL 吸取20mL冰醋酸，加入2g甘氨酸，再加入无离子水，定容至500mL,低温保存，使用 时再稀释10倍。 3.凝胶缓冲液(250mL) 吸取冰醋酸5mL,加入0.25g甘氨酸，再加入无离子水定容至250mL,低温保存。 4.0.6%过氧化氢液(30mL) 吸取30%过氧化氢原液0.6L,加无离子水，定容至30mL,装入100m1滴瓶，低温保 存。 5.染色液 (1)10%三氯醋酸液(500mlL)称取50g三氯醋酸，加入无离子水，定容500mL。 (2)1%考马斯亮蓝液(50m)称取0.5g考马斯亮蓝，溶于50mL无水酒精。 6.凝胶溶液(200mL 称取丙烯酰胺20g、亚甲基丙烯酰胺0.8g、尿素12g抗坏血酸0.2g、硫酸亚铁0.01g, 再加入120mL凝胶缓冲液溶解，并用该液定容至200mL,低温保存备用。 注：配制试剂需用去离子水或重蒸水。 五、操作程序 1.样品醇溶蛋白提取 取若干个清洁干燥的1L聚丙烯离心管，分别插入合适的试管架圆孔内，取小麦或大 麦种子样品逐粒用样品钳夹碎，在夹种子时，最好垫上小片清洁的纸，以免清理钳头和防止 样品之间污染，每粒夹碎的种子粉块放人一个离心管。真实性鉴定时，每个样品重复3一5 次：品种纯度测定时，每个样品测定50-100粒种子，然后加入样品提取液，每管小麦加入 0.2mL,每管大麦加入0.3ml,盖好后在室温下将其浸提一夜，加样前用5500r/min,离心 15min。 2.凝胶玻璃封缝四、溶液的配制 1．提取液 (1)小麦提取液(100mL)，称取甲基绿粉剂 0.05g，加入 25 ml 2—氯乙醇，再加入无离 子水，定容至 100ml,低温保存。 (2)大麦提取液(100mL) 称取甲基绿粉剂 0.05 g，加入 20ml 2—氯乙醇加人 18 g 尿 素，再加入 1 ml 2—巯基乙醇，然后加入无离子水，定容至 100mL，低温保存。 2．电极缓冲原液(500mL) 吸取 20mL 冰醋酸，加入 2g 甘氨酸，再加入无离子水，定容至 500mL，低温保存，使用 时再稀释 10 倍。 3．凝胶缓冲液(250mL) 吸取冰醋酸 5mL，加入 0.25g 甘氨酸，再加入无离子水定容至 250mL，低温保存。 4．0.6％过氧化氢液(30mL) 吸取 30％过氧化氢原液 0.6 mL，加无离子水，定容至 30mL，装入 100ml 滴瓶，低温保 存。 5．染色液 (1)10％三氯醋酸液(500mL) 称取 50g 三氯醋酸，加入无离子水，定容 500mL。 (2)1％考马斯亮蓝液(50mL) 称取 0.5g 考马斯亮蓝，溶于 50mL 无水酒精。 6．凝胶溶液(200mL) 称取丙烯酰胺 20g、亚甲基丙烯酰胺 0.8 g、尿素 12 g 抗坏血酸 0.2 g、硫酸亚铁 0．0lg， 再加入 120mL 凝胶缓冲液溶解，并用该液定容至 200mL，低温保存备用。 注：配制试剂需用去离子水或重蒸水。 五、操作程序 1．样品醇溶蛋白提取 取若干个清洁干燥的 1 mL 聚丙烯离心管，分别插入合适的试管架圆孔内，取小麦或大 麦种子样品逐粒用样品钳夹碎，在夹种子时，最好垫上小片清洁的纸，以免清理钳头和防止 样品之间污染，每粒夹碎的种子粉块放人一个离心管。真实性鉴定时，每个样品重复 3～5 次；品种纯度测定时，每个样品测定 50—100 粒种子，然后加入样品提取液，每管小麦加入 0.2mL，每管大麦加入 0.3mL，盖好后在室温下将其浸提一夜，加样前用 5 500r／min，离心 15 min。 2．凝胶玻璃封缝