从冰箱内取出凝胶溶液和过氧化氢液、每块胶板吸取这种凝胶溶液3L,放入小烧杯后 立刻加入0.6%过氧化氢液小半滴，摇匀后迅速倒入封口处，稍加晃动，使整条缝口充满胶 液，让其在5-l0加i聚合。但必须注意，灌胶动作应快速，否则会因为倒得太慢，在倒入 缝口处前，胶就开始聚合。 3.灌制分离胶和插入样品梳 从冰箱内取出凝胶溶液和过氧化氢液，每块胶板吸取凝胶液17-18l,放入烧杯后立即 加入1滴0.6%过氧化氢液，迅速摇匀，倒人凝胶玻板之间，马上插好样品梳，并用铁夹子 夹正，直放，让其在5-10min内完全聚合。 4.加样 在加样前，小心平衡地按出样品杭，用滤纸吸去多余的水分，然后用微量进样器吸取醇 溶蛋白提取液。一般每个样品加样10-20g,若加样量太多，会使蛋白质谱带模糊而难以分 辨。 5.电泳 在电泳前，先将电极缓冲液稀释10倍。一般每个电泳槽取80m1电极缓冲原液，加无离 子水稀释到800mL,分别注入前槽和后槽。注意要确保前、后槽电极能连通 接好电极引线，前槽接正极，后槽接负极，然后打开电源，逐渐将电压调到500V。电 泳时，要求在15-20温度下进行。如气温高于这一温度范围时，可放在冰箱内、空调室或 接通自来水冷却。电泳时间一般为60-80min。具体时间可按甲基绿迁移时间来推算。如果 甲基绿前沿提示剂在25-30min迁移至胶板底部(10cm左右)，那么，醇蛋白电泳时间为甲基 绿迁移时间的2~2.5倍，即60~80min左右。 6.固定和染色 在固定和染色前，按每块胶板吸取3.5ml1.0%考马斯亮蓝液，再加上100m110%三 氯醋酸液，配成染色液。 小心地剥下胶板，切去样品槽部分的胶板，并切去胶板一小角以做左右标记，然后用无 离子水漂洗后，浸入染色液染色1-2d。 7.保存 倒去染色液，用清水漂洗，并用湿软毛笔刷去胶板表面的沉淀物，然后用7%醋酸液保 存。 也可制成干胶板或装在聚乙烯薄膜袋里在4℃冰箱内保存数个月而不变质。 六、电泳图谱鉴定 从冰箱内取出凝胶溶液和过氧化氢液、每块胶板吸取这种凝胶溶液 3mL，放入小烧杯后 立刻加入 0.6％过氧化氢液小半滴，摇匀后迅速倒入封口处，稍加晃动，使整条缝口充满胶 液，让其在 5—10min 聚合。但必须注意，灌胶动作应快速，否则会因为倒得太慢，在倒入 缝口处前，胶就开始聚合。 3．灌制分离胶和插入样品梳 从冰箱内取出凝胶溶液和过氧化氢液，每块胶板吸取凝胶液 17-18ml，放入烧杯后立即 加入 1 滴 0.6％过氧化氢液，迅速摇匀，倒人凝胶玻板之间，马上插好样品梳，并用铁夹子 夹正，直放，让其在 5—10min 内完全聚合。 4．加样 在加样前，小心平衡地拨出样品梳，用滤纸吸去多余的水分，然后用微量进样器吸取醇 溶蛋白提取液。一般每个样品加样 10-20 g，若加样量太多，会使蛋白质谱带模糊而难以分 辨。 5．电泳 在电泳前，先将电极缓冲液稀释 10 倍。一般每个电泳槽取 80mL 电极缓冲原液，加无离 子水稀释到 800mL，分别注入前槽和后槽。注意要确保前、后槽电极能连通。 接好电极引线，前槽接正极，后槽接负极，然后打开电源，逐渐将电压调到 500V。电 泳时，要求在 15—20℃温度下进行。如气温高于这一温度范围时，可放在冰箱内、空调室或 接通自来水冷却。电泳时间一般为 60-80min。具体时间可按甲基绿迁移时间来推算。如果 甲基绿前沿提示剂在 25—30min 迁移至胶板底部(10cm 左右)，那么，醇蛋白电泳时间为甲基 绿迁移时间的 2～2.5 倍，即 60～80 min 左右。 6．固定和染色 在固定和染色前，按每块胶板吸取 3.5 mL 1.0％考马斯亮蓝液，再加上 100ml 10％三 氯醋酸液，配成染色液。 小心地剥下胶板，切去样品槽部分的胶板，并切去胶板一小角以做左右标记，然后用无 离子水漂洗后，浸入染色液染色 1—2d。 7．保存 倒去染色液，用清水漂洗，并用湿软毛笔刷去胶板表面的沉淀物，然后用 7％醋酸液保 存。 也可制成干胶板或装在聚乙烯薄膜袋里在 4 ℃冰箱内保存数个月而不变质。 六、电泳图谱鉴定