3、终止 RNA聚合酶到达转录终止点时,在终止辅助因子的帮助下,聚合反应停止,RNA链和聚合酶脱离DNA 模板链,msA又被σ亚基所取代。 由此形成RNA聚合酶起始复合物与终止复合物两种形式的循环。 三、启动子和转录因子 启动子:RNA聚合酶识别、结合并开始转录所必需的段DNA序列。 转录因子:RNA聚合酶在进行转录时,常需要一些辅助因子(蛋白质)参与作用,此类蛋白质统称为转 录因子。 足迹法和DNA测序法确定启动子的序列结构。 P363 原核启动子结构与功能 分析比较上百种启动子序列,发现不同的启动子都存在保守的共同序列,包括RNA聚合酶识别位点和 结合位点。 (1)、-10序列 (Pribnow框 在转录起点上游大约-10处,有一个6bp的保守序列 TATAAT,称 Pribnow框。此段序列出现在4到-13bp 之间,每个位点的保守性在459-100% 频度:T89ATsA6 sA6 TI0o 据预测, Pribnow框中,一开始的TA和第6位最保守的T在结合RNA聚合酎时起十分重要的作用 目前认为, Pribnow框决定转录方向。酶在此部位与DNA结合形成稳定的复合物, Pribnow框中DNA 序列在转录方向上解开,形成开放型起始结构,它是RNA聚合酶牢固的结合位点,是启动子的关键部位。 RNA聚合酶的结合,诱导富含AT的 Erenow框的双链解开,然后进·步扩大成17个核苷酸长度的泡 状物,在泡状物中RNA聚合酶从模板链开始转录RNA产物。 (2)、-35序列( Sexfama box)(识别区域) 只含-10序列的DNA不能转录,在10序列上游还有一个保守序列,其中心约在35位置,称为35序列, 此序列为RNA酶的识别区域 各碱基出现频率如下:T85T8G8A61C6As,其中TTG十分保守。 35序列的功能:它是原核RNA聚合酶全酶依靠σ因子的初始识别位点。因此,-35序列对RNA聚合酶 全酶有很高的亲和性。-35序列的核苷酸结构,在很大程度上决定了启动子的强度,RNA聚合酶易识别强的 启动子。 35序列提供RNA聚合酶识别信号, -10序列有助于DNA局部双链解开, 启动子结构的不对称性决定了转录的方向。 P364图204原核型启动子的结构４ 3、 终止 RNA 聚合酶到达转录终止点时，在终止辅助因子的帮助下，聚合反应停止，RNA 链和聚合酶脱离 DNA 模板链，nusA 又被σ亚基所取代。。 由此形成 RNA 聚合酶起始复合物与终止复合物两种形式的循环。 三、 启动子和转录因子 启动子：RNA聚合酶识别、结合并开始转录所必需的一段DNA 序列。 转录因子：RNA 聚合酶在进行转录时，常需要一些辅助因子（蛋白质）参与作用，此类蛋白质统称为转 录因子。 足迹法和 DNA 测序法确定启动子的序列结构。 P363 （一） 原核启动子结构与功能 分析比较上百种启动子序列，发现不同的启动子都存在保守的共同序列，包括 RNA 聚合酶识别位点和 结合位点。 （1）、 -10 序列（Pribnow 框） 在转录起点上游大约-10 处，有一个 6bp 的保守序列 TATAAT，称 Pribnow 框。此段序列出现在-4 到-13bp 之间，每个位点的保守性在45%-100%。 频度： T89 A89T50A65A65 T100 据预测，Pribnow框中，一开始的TA 和第6 位最保守的T在结合RNA 聚合酶时起十分重要的作用。 目前认为，Pribnow 框决定转录方向。酶在此部位与 DNA 结合形成稳定的复合物，Pribnow 框中 DNA 序列在转录方向上解开，形成开放型起始结构，它是RNA 聚合酶牢固的结合位点，是启动子的关键部位。 RNA 聚合酶的结合，诱导富含 AT 的 Pribnow 框的双链解开，然后进一步扩大成 17 个核苷酸长度的泡 状物，在泡状物中RNA 聚合酶从模板链开始转录RNA 产物。 （2）、 -35 序列（Sexfama box）（识别区域） 只含-10 序列的DNA不能转录，在-10 序列上游还有一个保守序列，其中心约在-35 位置，称为-35 序列， 此序列为 RNA 酶的识别区域。 各碱基出现频率如下：T85 T83 G81A61C69A52 ，其中TTG 十分保守。 -35 序列的功能：它是原核 RNA聚合酶全酶依靠σ因子的初始识别位点。因此，-35 序列对 RNA 聚合酶 全酶有很高的亲和性。-35 序列的核苷酸结构，在很大程度上决定了启动子的强度，RNA聚合酶易识别强的 启动子。 -35 序列提供RNA聚合酶识别信号， -10 序列有助于DNA 局部双链解开， 启动子结构的不对称性决定了转录的方向。 P364 图 20-4 原核型启动子的结构