粉20g,碎肉渣适量,pH78。 称取新鲜除脂肪和筋膜的碎牛肉500g,加蒸馏水100m1和lmol氢氧化钠溶液25ml,搅 拌煮沸15min,充分冷却,除去表层脂肪,澄清,过滤加水补足至1000ml。加入除碎肉渣外 各种成分,校正pH。碎肉渣经水洗后凉至半干,分装15m×150m试管2~3cm高,每管加还 原铁粉0.1~0.2g或铁屑少许。将上述液体培养基分装至每管内超过肉渣表面约1cm。上面覆 盖溶化的凡士林或液体石蜡0.3~0.4cm。121℃灭菌15mins 【用途】 用于肉毒梭菌的增菌培养。 (十)“ Lowenstein- Jensen”培养基(罗氏培养基) 【材料与方法】 磷酸二氢钾0.%6g,硫酸镁(MgSO7H2O)0.048g,天门冬酰胺0.72g,甘油(中性) 24ml,枸櫞酸镁0.l2g,蒸馏水12oml,马铃薯粉6.0g,新鲜鸡蛋6~8只,1%孔雀绿溶液 8ml 1、将天门冬酰胺,磷酸二氢钾,枸橼酸镁及甘油加水后,置沸水浴中加热溶解。 2、加入马铃薯粉,继续在沸水浴中加热30分钟,时加搅拌,使成均匀糊状 3、待冷至60℃,加入新鲜全蛋液200ml及1%孔雀绿8ml,充分搅匀后,用双层纱布 4、分装于20×150mm试管中,每管约8ml,塞紧,置成长斜面。 5、用85℃50分钟流通蒸气灭菌后,经37℃孵育48小时,证明无菌生长:冷置备用。 6、管内如无凝结水,可加无菌生理盐水0.5m以防在贮存期中培养基干燥 7、以无菌操作换上软木塞,置37℃培养48小时,无菌生长即可应用。 【用途】 主要用于分枝杆菌的分离培养。 (十一)巧克力色琼脂平板的制备 【材料】肉汤琼脂100m无菌脱纤维羊或兔血10ml 【方法】 (1)将肉汤琼脂加热溶化,趁热加入脱纤维血,摇匀 (2)倾注平板,待冷却成巧克力色,备用。 【用途】用于培养脑膜炎双球菌或淋球菌。 【说明】加血一定要趁热加。 二、细菌培养接种技术 细菌培养技术可以纯化细菌,了解细菌的生长特征,进一步检测细菌生化反应、变异性, 制备细菌抗原,进行分子生物学工作等。了解细菌的培养特征也有助于鉴别细菌 由于细菌感染而致病的各种标本及带菌者所需检查的各种标本,往往并非单一的细菌 而且混有其它非致病菌(人体正常菌群)。因此当对此标本需作出细菌鉴定时,就必须从标 本中分离出致病菌,称为细菌分高培养技术。另外,对已得到可疑病菌进行细菌鉴定及菌种 保存等培养,称为纯培养接种技术。 在微生物学实验中,无菌操作主要包括斜面接种、液体接种、平板接种、倒制平板和稀 释分离等。14 粉2.0g，碎肉渣适量，pH7.8。 称取新鲜除脂肪和筋膜的碎牛肉500g，加蒸馏水1000ml和1mol/L氢氧化钠溶液25ml，搅 拌煮沸15min，充分冷却，除去表层脂肪，澄清，过滤加水补足至1000ml。加入除碎肉渣外 各种成分，校正pH。碎肉渣经水洗后凉至半干，分装15㎜×150㎜试管2～3㎝高，每管加还 原铁粉0.1～0.2 g或铁屑少许。将上述液体培养基分装至每管内超过肉渣表面约1㎝。上面覆 盖溶化的凡士林或液体石蜡0.3～0.4㎝。121℃灭菌15min。 【用途】 用于肉毒梭菌的增菌培养。 （十） “Lowenstein-Jensen”培养基（罗氏培养基） 【材料与方法】 磷酸二氢钾 0.96g，硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.048g，天门冬酰胺 0.72g，甘油（中性） 2.4ml，枸橼酸镁 0.12g，蒸馏水 120ml，马铃薯粉 6.0g，新鲜鸡蛋 6～8 只，1%孔雀绿溶液 8ml 1、将天门冬酰胺，磷酸二氢钾，枸橼酸镁及甘油加水后，置沸水浴中加热溶解。 2、加入马铃薯粉，继续在沸水浴中加热 30 分钟，时加搅拌，使成均匀糊状。 3、待冷至 60℃，加入新鲜全蛋液 200ml 及 1％孔雀绿 8ml，充分搅匀后，用双层纱布 过滤。 4、分装于 20×150mm 试管中，每管约 8ml，塞紧，置成长斜面。 5、用 85℃50 分钟流通蒸气灭菌后，经 37℃孵育 48 小时，证明无菌生长；冷置备用。 6、管内如无凝结水，可加无菌生理盐水 0.5ml 以防在贮存期中培养基干燥。 7、以无菌操作换上软木塞，置 37℃培养 48 小时，无菌生长即可应用。 【用途】 主要用于分枝杆菌的分离培养。 （十一）巧克力色琼脂平板的制备 【材料】肉汤琼脂100ml 无菌脱纤维羊或兔血10ml。 【方法】 （1）将肉汤琼脂加热溶化，趁热加入脱纤维血，摇匀。 （2）倾注平板，待冷却成巧克力色，备用。 【用途】用于培养脑膜炎双球菌或淋球菌。 【说明】加血一定要趁热加。 二、 细菌培养接种技术 细菌培养技术可以纯化细菌，了解细菌的生长特征，进一步检测细菌生化反应、变异性， 制备细菌抗原，进行分子生物学工作等。了解细菌的培养特征也有助于鉴别细菌。 由于细菌感染而致病的各种标本及带菌者所需检查的各种标本，往往并非单一的细菌， 而且混有其它非致病菌（人体正常菌群）。因此当对此标本需作出细菌鉴定时，就必须从标 本中分离出致病菌，称为细菌分离培养技术。另外，对已得到可疑病菌进行细菌鉴定及菌种 保存等培养，称为纯培养接种技术。 在微生物学实验中，无菌操作主要包括斜面接种、液体接种、平板接种、倒制平板和稀 释分离等