二维电泳等电聚焦和SDS-PAGE结合能获得非常高的分辨效率。样品先用等电聚焦分离， 然后将一等电聚焦条水平放置于$DS聚丙烯酰胺凝胶顶部，沿与聚焦条垂直的方向电泳， 使蛋白质分布于二维面。因此水平方向的电泳分离基础是是蛋白质等电点差异，垂直方向分 离的基础是蛋白质质量的差异。用二维电泳分离大肠杆菌蛋白质抽提液，一次能获得一千多 个蛋白质凝胶电泳，点（图3.12）。 Low pH Isoelectric focusing (+) 图3.12二维凝胶电泳。(A)蛋白样品先用等电聚焦电泳分离（方法与311相同）。然后将 等电聚焦后的凝胶置于SDS-凝胶顶部，沿原来分离方向垂直的方向进行电泳。电泳分离的 基础是蛋白质的分子量。(B)用二维凝胶电泳分离大肠杆菌抽提液，能分离出一千多种蛋 白质。第一相是水平方向进行等电聚焦（根据等电点差异），第二相（垂直方向）进行SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳（根据分子质量差异）。 可以用二维凝胶电泳分离不同生理状态细胞的蛋白质。在应对细胞生理状态变化时，某 一蛋白质含量会升高或降低。我们怎样鉴定出应答这种变化的蛋白质呢？尽管二维凝胶有很 多蛋白质样品点，但是各个样品点的本质还不清楚。将二维凝胶电泳与质谱分析技术相结合 能够鉴定各个蛋白点的本质。在3.5节我们将简单介绍这些技术。 蛋白纯化方案的定量评估 为了保证蛋白纯化方案是可行的，要测定每个纯化步骤纯化产物的比活性，并进行 SDS-PAGE分析。表3.1和图3.13列出了纯化一个虚构蛋白质各个步骤所获得的结果。在纯 化的每个步骤都要测定下列参数： 总蛋白：从纯化液中取出一定体积溶液测定蛋白浓度，该浓度与溶液总体积的乘积就是溶液 的总蛋白量。 总活性：从纯化液中取出一定体积溶液测定蛋白活性，该活性数据与溶液总体积的乘积就是 溶液的总蛋白活性。 比活性：蛋白的总活性与总蛋白量的比值。 产率：该参数用来衡量纯化操作保留了多少蛋白活性（与初抽提液相比）。初抽提液活性定 义为100%。 纯化水平：每步纯化后蛋白质的比活性与初抽提液比活性的比值。这个数值愈大表明蛋白质 纯度愈高。二维电泳 等电聚焦和 SDS-PAGE 结合能获得非常高的分辨效率。样品先用等电聚焦分离， 然后将一等电聚焦条水平放置于 SDS-聚丙烯酰胺凝胶顶部，沿与聚焦条垂直的方向电泳， 使蛋白质分布于二维面。因此水平方向的电泳分离基础是是蛋白质等电点差异，垂直方向分 离的基础是蛋白质质量的差异。用二维电泳分离大肠杆菌蛋白质抽提液，一次能获得一千多 个蛋白质凝胶电泳点（图 3.12）。 图 3.12 二维凝胶电泳。（A）蛋白样品先用等电聚焦电泳分离（方法与 3.11 相同）。然后将 等电聚焦后的凝胶置于 SDS-凝胶顶部，沿原来分离方向垂直的方向进行电泳。电泳分离的 基础是蛋白质的分子量。（B）用二维凝胶电泳分离大肠杆菌抽提液，能分离出一千多种蛋 白质。第一相是水平方向进行等电聚焦（根据等电点差异），第二相（垂直方向）进行 SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳（根据分子质量差异）。 可以用二维凝胶电泳分离不同生理状态细胞的蛋白质。在应对细胞生理状态变化时，某 一蛋白质含量会升高或降低。我们怎样鉴定出应答这种变化的蛋白质呢？尽管二维凝胶有很 多蛋白质样品点，但是各个样品点的本质还不清楚。将二维凝胶电泳与质谱分析技术相结合 能够鉴定各个蛋白点的本质。在 3.5 节我们将简单介绍这些技术。 蛋白纯化方案的定量评估 为了保证蛋白纯化方案是可行的，要测定每个纯化步骤纯化产物的比活性，并进行 SDS-PAGE 分析。表 3.1 和图 3.13 列出了纯化一个虚构蛋白质各个步骤所获得的结果。在纯 化的每个步骤都要测定下列参数： 总蛋白：从纯化液中取出一定体积溶液测定蛋白浓度，该浓度与溶液总体积的乘积就是溶液 的总蛋白量。 总活性：从纯化液中取出一定体积溶液测定蛋白活性，该活性数据与溶液总体积的乘积就是 溶液的总蛋白活性。 比活性：蛋白的总活性与总蛋白量的比值。 产率：该参数用来衡量纯化操作保留了多少蛋白活性（与初抽提液相比）。初抽提液活性定 义为 100%。 纯化水平：每步纯化后蛋白质的比活性与初抽提液比活性的比值。这个数值愈大表明蛋白质 纯度愈高