小蛋白质分子在凝胶中泳动快，大蛋白质分子泳动慢。在这些条件下，大多数多肽链的 迁移率与蛋白质质量的对数值成线性关系（图310）。有些雷含糖的蛋白质或膜蛋白不服从 这个经验公式，SDS-凝胶电泳（通常叫SDS-PAGE)速度快、灵敏度高、分辨率高。用Coomassie 蓝染色能检测出01g的蛋白质条带，用银染色甚至能够检测出0.02μg以下的蛋白质条带。 分子质量差异只有2%的蛋白质（如50kD和51kD,长度只有10个氨基酸）就能用凝胶电 泳区分。 用电泳检测我们能够确定纯化方案的效益。起始组分将有几十甚至几百个蛋白质条带。 随着纯化操作的进行，蛋白质条带会消失，只有一条蛋白质条带强度逐步增加。这个条带就 是我们所需要的蛋白质条带。 10 60 50 40- 30- 20 1000.20.40.60.8.0 Relative mobility 5二n 图3.10电泳能够测定蛋白质分子质量。很多蛋白质在SDS-聚丙烯酰胺凝胶的电泳迁移率与 蛋白分子质量的对数值负相关。 等电聚焦依据蛋白质酸性氨基酸残基和碱性氨基酸残基相对含量的差异也能将蛋白质分 开。蛋白质等电点()是蛋白质分子净电荷为零时溶液的pH值。此时，蛋白质在电场中不 泳动。例如细胞色素c的等电点是10.6，而血清白蛋白的等电点是4.8.。无需SDS,直接用 pH梯度凝胶电泳分离这些蛋白混合物。每个蛋白质将移动到介质pH值等于自身l值处。 依据蛋白质等电，点分离蛋白质的方法叫等电聚焦(isoelectric focusing)。将具有不同等电，点 的两性电解质（聚合物）混合液加入凝胶，能够形成pH梯度。等电聚焦电泳能够将pl值 差异只有0.01%的蛋白质分开，即净电荷差异只有一个的蛋白质也能分开（图311）。 (A) Low pH High pH (+) - (B) Low pH High pH (+) (-) 图3.11等电聚焦原理。上样之前凝胶已经形成pH梯度。(A)上样后，施加电压使带电离 子泳动。蛋白质会泳动至自身等电点，此时蛋白质没有净电荷。(B)切下蛋白条带，用于 后续实验。小蛋白质分子在凝胶中泳动快，大蛋白质分子泳动慢。在这些条件下，大多数多肽链的 迁移率与蛋白质质量的对数值成线性关系（图 3.10）。有些富含糖的蛋白质或膜蛋白不服从 这个经验公式。SDS-凝胶电泳（通常叫SDS-PAGE）速度快、灵敏度高、分辨率高。用 Coomassie 蓝染色能检测出 0.1 g 的蛋白质条带，用银染色甚至能够检测出 0.02 g 以下的蛋白质条带。 分子质量差异只有 2%的蛋白质（如 50 kD 和 51kD, 长度只有 10 个氨基酸）就能用凝胶电 泳区分。 用电泳检测我们能够确定纯化方案的效益。起始组分将有几十甚至几百个蛋白质条带。 随着纯化操作的进行，蛋白质条带会消失，只有一条蛋白质条带强度逐步增加。这个条带就 是我们所需要的蛋白质条带。 图 3.10 电泳能够测定蛋白质分子质量。很多蛋白质在 SDS-聚丙烯酰胺凝胶的电泳迁移率与 蛋白分子质量的对数值负相关。 等电聚焦 依据蛋白质酸性氨基酸残基和碱性氨基酸残基相对含量的差异也能将蛋白质分 开。 蛋白质等电点(pI)是蛋白质分子净电荷为零时溶液的 pH 值。此时，蛋白质在电场中不 泳动。例如细胞色素 c 的等电点是 10.6，而血清白蛋白的等电点是 4.8.。无需 SDS，直接用 pH 梯度凝胶电泳分离这些蛋白混合物。每个蛋白质将移动到介质 pH 值等于自身 pI 值处。 依据蛋白质等电点分离蛋白质的方法叫等电聚焦（isoelectric focusing）。将具有不同等电点 的两性电解质（聚合物）混合液加入凝胶，能够形成 pH 梯度。等电聚焦电泳能够将 pI 值 差异只有 0.01%的蛋白质分开，即净电荷差异只有一个的蛋白质也能分开（图 3.11）。 图 3.11 等电聚焦原理。上样之前凝胶已经形成 pH 梯度。（A）上样后，施加电压使带电离 子泳动。蛋白质会泳动至自身等电点，此时蛋白质没有净电荷。（B）切下蛋白条带，用于 后续实验