电泳分离几乎总是在凝胶（或在固相载体如纸上）进行。由于凝胶是多孔介质，因此有 分子筛效应，能够促进电泳的分离效果（图37）。比凝胶孔小的分子能跨过整个凝胶，比凝 胶孔大得多的分子几乎不能泳动。而分子大小居中的蛋白质则在凝胶中移动程度不同。电泳 的方向自顶部向底部。电泳的固相介质是一个垂直的薄层聚丙烯酰胺凝胶。选择聚丙烯酰胺 凝胶的原因是(1)化学惰性；和(2)添加少量交联试剂就能使丙烯酰胺聚合成具有三维网 状的凝胶（图38）。电泳与凝胶过滤不同点在于，电泳时所有分子（无论大小）被迫穿过同 一介质移动。 +人 Acrylamide Methylenebisacrylamide 5202 (persulfate) 2504 (sulfate radical, initiates polymerization) CONH2 CONH2 CONH2 CONH2 H CONH CONH2 CONH2 图3.8聚丙烯酰胺凝胶的形成。活化单体（丙烯酰胺，蓝色）与交联剂（红色）共聚合形成 三维网状结构。 在变性条件下，蛋白质凝胶电泳主要是依据分子质量差异进行分离。蛋白质混合物先溶 解在十二烷基硫酸钠溶液中。十二烷基硫酸钠是阴离子型去污剂，能够破坏蛋白质分子中各 种非共价键。加入2-巯基乙醇或二巯基苏糖醇(DTT)能消除蛋白质的二硫键。SDS阴离 子与蛋白质结合按照一个SDS分子结合多肽链的2个氨基酸残基比例进行。SDS与变性蛋 白质形成的复合物的净电荷数量与蛋白质质量成正比。因此与SDS结合后蛋白质复合物的 负电荷数量远远大于天然蛋白质的净电荷数量（天然蛋白质净电荷数量效应可以忽略不计）。 然后在电场中电泳驱动蛋白质-SDS复合物移动。当电泳完成后，用银或染料（如Coomassie 蓝)染色能够观察蛋白质条带（图39)。如果蛋白质分子已经被放射性同位素标记，可以将 X-光片置于凝胶表面曝光探测，即放射性自显彩。 图3.9电泳后染色蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后，蛋白质用Coomassie blue染色观察。电泳分离几乎总是在凝胶（或在固相载体如纸上）进行。由于凝胶是多孔介质，因此有 分子筛效应，能够促进电泳的分离效果（图 3.7）。比凝胶孔小的分子能跨过整个凝胶，比凝 胶孔大得多的分子几乎不能泳动。而分子大小居中的蛋白质则在凝胶中移动程度不同。电泳 的方向自顶部向底部。电泳的固相介质是一个垂直的薄层聚丙烯酰胺凝胶。选择聚丙烯酰胺 凝胶的原因是（1）化学惰性；和 (2) 添加少量交联试剂就能使丙烯酰胺聚合成具有三维网 状的凝胶（图 3.8）。电泳与凝胶过滤不同点在于，电泳时所有分子（无论大小）被迫穿过同 一介质移动。 图 3.8 聚丙烯酰胺凝胶的形成。活化单体（丙烯酰胺，蓝色）与交联剂（红色）共聚合形成 三维网状结构。 在变性条件下，蛋白质凝胶电泳主要是依据分子质量差异进行分离。蛋白质混合物先溶 解在十二烷基硫酸钠溶液中。十二烷基硫酸钠是阴离子型去污剂，能够破坏蛋白质分子中各 种非共价键。加入 2-巯基乙醇或二巯基苏糖醇（DTT）能消除蛋白质的二硫键。SDS 阴离 子与蛋白质结合按照一个 SDS 分子结合多肽链的 2 个氨基酸残基比例进行。SDS 与变性蛋 白质形成的复合物的净电荷数量与蛋白质质量成正比。因此与 SDS 结合后蛋白质复合物的 负电荷数量远远大于天然蛋白质的净电荷数量（天然蛋白质净电荷数量效应可以忽略不计）。 然后在电场中电泳驱动蛋白质-SDS 复合物移动。当电泳完成后，用银或染料（如 Coomassie 蓝）染色能够观察蛋白质条带（图 3.9）。如果蛋白质分子已经被放射性同位素标记，可以将 x-光片置于凝胶表面曝光探测，即放射性自显影。 图 3.9 电泳后染色蛋白质。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后，蛋白质用 Coomassie blue 染色观察