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0.24 0.16 0.04 0 10 Time(minutes) e 图3.6高效液相层析(HPLC)。HPLC进行凝胶过滤能够将下列蛋白质更好地分开。这些 蛋白质是(1)thyroglobulin(甲状腺球蛋白,669kD)、(2)catalase(过氧化氢酶,232kD)、 (3)bovine serum albumin(牛血清白蛋白,67kD)、(4)ovalbumin(卵白蛋白,43kD)、和 (5)Ribonuclease(核酸酶13.4kD)。 凝胶电泳分离、显示蛋白质 怎样判断纯化方案有效?一种方式是在每一个纯化步骤执行之后测定蛋白质的活性。另 一种方案是测定各个步骤纯化产物的蛋白条带数目,看蛋白质条带是否减少。电泳技术使后 一种检测方案成为可能。 凝胶电泳。在电场中带有净电荷的蛋白质能够移动,这种现象叫电泳。电泳是分离蛋白质及 其它生物大分子如DNA和RNA的有效技术。电场中蛋白质或其它分子的迁移速度(V)取决 于电场强度(E),蛋白质的净电荷(Z),和摩擦系数()。 V=Ez/f (1) 电力z驱使带电分子向相反的电极移动。这种移动受到移动分子与介质之间的摩擦力「 的阻滞。摩擦系数f取决于迁移分子的质量和形状、以及介质的粘度。对于半径为「的球状 蛋白质而言, f=6πnr (2) (A) (B) Mixture of macro- molecules Electrophoresis Direction of electro- phoresis Porous gel Figure 3-7 mp 图3.7聚丙烯酰胺凝胶电泳。(A)凝胶电泳装置。将蛋白样品加入平板凝胶的顶部上样孔 中(每孔加样量是几微升)。然后盖住电泳槽,接通电源电泳。蛋白质与SDS形成复合物(带 负电荷)就会向底部正极移动。(B)多空凝胶的分子筛能够将蛋白质按大小分离开来,最 小的分子移动最快。图 3.6 高效液相层析(HPLC)。HPLC 进行凝胶过滤能够将下列蛋白质更好地分开。这些 蛋白质是(1)thyroglobulin(甲状腺球蛋白,669kD)、(2)catalase (过氧化氢酶,232kD)、 (3)bovine serum albumin (牛血清白蛋白,67kD)、(4)ovalbumin(卵白蛋白,43kD)、和 (5)Ribonuclease (核酸酶 13.4kD)。 凝胶电泳分离、显示蛋白质 怎样判断纯化方案有效?一种方式是在每一个纯化步骤执行之后测定蛋白质的活性。另 一种方案是测定各个步骤纯化产物的蛋白条带数目,看蛋白质条带是否减少。电泳技术使后 一种检测方案成为可能。 凝胶电泳。在电场中带有净电荷的蛋白质能够移动,这种现象叫电泳。电泳是分离蛋白质及 其它生物大分子如 DNA 和 RNA 的有效技术。电场中蛋白质或其它分子的迁移速度(v)取决 于电场强度(E),蛋白质的净电荷(z),和摩擦系数(f)。  = Ez/f (1) 电力 Ez 驱使带电分子向相反的电极移动。这种移动受到移动分子与介质之间的摩擦力 f 的阻滞。摩擦系数 f 取决于迁移分子的质量和形状、以及介质的粘度。对于半径为 r 的球状 蛋白质而言, f = 6   r (2) 图 3.7 聚丙烯酰胺凝胶电泳。(A)凝胶电泳装置。将蛋白样品加入平板凝胶的顶部上样孔 中(每孔加样量是几微升)。然后盖住电泳槽,接通电源电泳。蛋白质与 SDS 形成复合物(带 负电荷)就会向底部正极移动。(B)多空凝胶的分子筛能够将蛋白质按大小分离开来,最 小的分子移动最快
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