3).表面活性剂 2.有机溶剂法 设 作用是绵白质和线成白一脂界面。 3.生物法 4.细脆物瘦破碎方法 渗透压冲击法(Osmotic Shock) 原理 铁：费用高，对周长，用于原史 特： 5.冷沫一融化法(Frecring an thawing) 1、最温和的一种方法 原理 2、选择性高，秤放迷度快，工艺简单，易放大 的形成和的融化行细 个冻的目的 峡点 缺点： 存在着高益浓度对产品污染问题。 的一利用。 7 可使细胞膜表面发生变化，胞内产物可以释放 出来，由于没有整体破碎细胞，可实现选择性 释放. 2). 有机溶剂法 生化分离工程 第三章 第三章 | 如采用异丙醇处理酵母，释放超氧化物歧化酶， 处理后，超氧化物歧化酶释放率达90％，纯化因 子提高25。 能够作用细胞质和细胞壁膜，膜结构中的脂蛋白 成分被或多或少地溶解，使细胞渗透作用有利于 某些蛋白的通过。如：SDS等 作用是溶解蛋白质和扰乱蛋白－脂界面。 3).表面活性剂 生化分离工程 第三章 第三章 | 化学渗透法的优点：避免大量细胞碎片，核酸留 在胞内，处理后，溶液很容易澄清，简化后处理 步骤，简单的搅拌容器代替了机械破碎设备。 缺点是价格昂贵，易污染产物，会导致产物活性和 最优产量的不可逆损失。 3. 生物法 酶溶法是利用酶反应分解破坏细胞壁上特殊的键 而达到破壁的目的，以提高胞内产物和通透性。 优点：生物转移性强，操作条件温和、能量低、 可避免高剪切力，确保产物破坏最小。 生化分离工程 第三章 第三章 | 缺点：费用高，时间长，多用于原生质体 自溶作用是酶溶的另一种方式，通过调节温度， pH或添加有机溶剂等激活剂，诱使细胞产生溶解 自身的酶的方法，称为自溶。 渗透压冲击法（Osmotic Shock） 将细胞放在高渗透压的介质中（如一定浓度的 甘油或蔗糖溶液） 达到平衡后 介质被突然 4. 细胞物理破碎方法 原理 生化分离工程 第三章 第三章 | 甘油或蔗糖溶液），达到平衡后，介质被突然 稀释，或者将细胞转入缓冲液中，由于渗透压 的突然变化，水迅速通过细胞壁和细胞膜进入 细胞，引起细胞壁和膜膨胀破裂，从而使细胞 通透性增大。 1、最温和的一种方法 2、选择性高，释放速度快，工艺简单，易放大 3、适用于易破碎的细胞，和细胞壁预先受到酶 处理的细胞，及合成受抑制而强度减弱的细胞， 特点： 生化分离工程 第三章 第三章 | 处理的细胞，及合成受抑制而强度减弱的细胞， 如动物细胞和革兰氏阴性菌。 缺点： 存在着高盐浓度对产品污染问题。 5. 冷冻－融化法 (Freczing an thawing) 破坏细胞膜的疏水键，增加其亲水性和通透性，而 且由于胞内水结晶使胞内外产生溶液浓度差，在渗 通过水结晶的形成和随后的融化而进行细胞破碎。 原理 冷冻的目的 生化分离工程 第三章 第三章 | 透压作用下引起细胞膨胀而破裂。 本法对于存在于细胞质周围靠近细胞膜的胞内产物 释放较为有效，但由于本法成本高，只能进行小规 模应用，且释放速率慢、产量低，另外酶易失活也 限制了它的更进一步利用。 缺点