(二)抗体芯片 利用蛋白质芯片分析蛋白质功能已成为一种趋势。通常,一个蛋白质芯片上 可以容纳一种蛋白质的所有变异体,一个蛋白质家族的所有成员,一条信号通路 中的所有蛋白质,甚至是来自一种组织、器官或有机体的所有蛋白。蛋白质芯片 利用位于芯片表面上的探针来捕获各种待检测的蛋白质,最常用的探针是抗体, 这是由于抗原-抗体的反应有着非常强的特异性。这种以各种抗体为探针的蛋白 质芯片常被称作抗体芯片。 作为一种重要的蛋白质芯片类型,抗体芯片已经成为蛋白芯片中发展最快、 技术更成熟的生物芯片。第一张商品化的抗体芯片是由美国 BD Clontech公司推 出的 Ab Microarray380。这是一张用于研究的抗体芯片,该芯片上排列了378种 已知蛋白的单抗,这些单抗对应的蛋白都是细胞结构和功能上十分重要的蛋白 涉及信号传导、肿瘤发生、细胞周期调控、细胞结构、细胞凋亡等广泛的领域。 Ab microarray380上所点的抗体都是经过精心挑选的,这些抗体不仅可以识别人 源的蛋白,对小鼠和大鼠样品同样有效。同时,每个抗体的结合亲和力都经过了 实验测定,从多种抗体来源的克隆中筛选出反应特异性好,交叉反应程度小,信 号明显的抗体,保证了信号与抗原浓度有着良好的线性关系。通过这张芯片,我 们在一次实验中就能够比较几百种蛋白的表达变化。目前,已有一大批抗体芯片 面市,其中有的抗体芯片已经在向临床应用上发展,成为重要的诊断工具,如肿 瘤标志物抗体芯片等 、常规抗体芯片制作与检测的流程 常规的活性抗体芯片制作与检测的流程主要包含以下步骤:①利用噬菌体展 示技术制备抗体文库;②利用机器人将抗体文库以阵列形式固定在芯片载体上; ③分别从对照(如正常组织)和待检样品(如病变组织)中提取蛋白质组;④利 用不同的标记物对所提取的蛋白质组进行适当的标记;⑤将标记过的蛋白质组与 芯片进行抗原-抗体反应,再经洗脱除去未反应(结合)的蛋白;⑥通过酶联免 疫吸附( ELISA)、荧光扫描、质谱仪等检测分析结果 图121抗体芯片检测流程（二）抗体芯片 利用蛋白质芯片分析蛋白质功能已成为一种趋势。通常，一个蛋白质芯片上 可以容纳一种蛋白质的所有变异体，一个蛋白质家族的所有成员，一条信号通路 中的所有蛋白质，甚至是来自一种组织、器官或有机体的所有蛋白。蛋白质芯片 利用位于芯片表面上的探针来捕获各种待检测的蛋白质，最常用的探针是抗体， 这是由于抗原-抗体的反应有着非常强的特异性。这种以各种抗体为探针的蛋白 质芯片常被称作抗体芯片。 作为一种重要的蛋白质芯片类型，抗体芯片已经成为蛋白芯片中发展最快、 技术更成熟的生物芯片。第一张商品化的抗体芯片是由美国 BD Clontech 公司推 出的 Ab Microarray 380。这是一张用于研究的抗体芯片，该芯片上排列了 378 种 已知蛋白的单抗，这些单抗对应的蛋白都是细胞结构和功能上十分重要的蛋白， 涉及信号传导、肿瘤发生、细胞周期调控、细胞结构、细胞凋亡等广泛的领域。 Ab Microarray 380 上所点的抗体都是经过精心挑选的，这些抗体不仅可以识别人 源的蛋白，对小鼠和大鼠样品同样有效。同时，每个抗体的结合亲和力都经过了 实验测定，从多种抗体来源的克隆中筛选出反应特异性好，交叉反应程度小，信 号明显的抗体，保证了信号与抗原浓度有着良好的线性关系。通过这张芯片，我 们在一次实验中就能够比较几百种蛋白的表达变化。目前，已有一大批抗体芯片 面市，其中有的抗体芯片已经在向临床应用上发展，成为重要的诊断工具，如肿 瘤标志物抗体芯片等。 二、常规抗体芯片制作与检测的流程 常规的活性抗体芯片制作与检测的流程主要包含以下步骤：①利用噬菌体展 示技术制备抗体文库；②利用机器人将抗体文库以阵列形式固定在芯片载体上； ③分别从对照（如正常组织）和待检样品（如病变组织）中提取蛋白质组；④利 用不同的标记物对所提取的蛋白质组进行适当的标记；⑤将标记过的蛋白质组与 芯片进行抗原-抗体反应，再经洗脱除去未反应（结合）的蛋白；⑥通过酶联免 疫吸附（ELISA）、荧光扫描、质谱仪等检测分析结果。 图 1-2-1 抗体芯片检测流程