2.相差显微镜相差显微镜(phase contrast microscope)是用于观察组织培养中活细胞形 态结构的。活细胞无色透明，一般光镜下不易分辨细胞轮廓及其结构。相差显微镜的特点是将 活细胞不同厚度及细胞内各种结构对光产生的不同折射作用，转换为光密度差异（明暗差）， 使镜下结构反差明显，影像清楚。组织培养研究常用的是倒置相差显微镜(inverted phase contrast microscope),它的光源和聚光器在载物台的上方，物镜在载物台的下方，便于观察 贴附在培养器皿底壁上的活细胞. 3.暗视野显微镜暗视野显微镜(dark-field microscope)主要用于观察因反差或分辨力不 足的微小颗粒。此种显微镜主要是有一个暗视野集光器，使光线不直接进入物境，故呈暗视 野。而标本内的小颗粒产生的衍射光或散射光进入物镜，暗视野中的颗粒呈明亮小点，如同在 暗室可见一束光线中的微小尘粒一般。普通通光镜最大分辨率为0.2μm,暗视野显微镜则可分 辨0.004~0.2μm的微粒，适用于观察细胞内线粒体运动及标本中细菌等微粒的运动等。 4,.共集激光扫描显微镜共焦激光扫描显微镜（confocal laser scanning microscope,.CLSM)是近10年研制成的高光敏度、高分辨率的新型仪器。它以激光为光源，光 束经聚焦后落在样品（组织厚片或细跑）不同深度的微小一点，并作移动扫描，通过电信号彩 色显像，经过微机图像分析系统进行二维和三维分析处理。CLSM可对细胞进行三维结构图像 分析，细胞内各种荧光标记物的微量分析，细胞内C+、pH值等的动态分析测定，细胞的受 体移动、膜电位变化、酶活性和物质转运的测定，并以激光对细胞及其染色体进行切割、分 离、筛选和克隆。因此，CLSM是一种高技术产品，可对细胞的多种功能进行全自动、高效、 快速的微量定性和定量测定。 其他如偏光显微镜用于研究组织晶体物质及纤维等的光学性质，紫外光显微镜用于研究细 胞内核酸的分布与定量等】 (三)组织化学和细胞化学术 组织化学(histochemistry)和细胞化学(cytochemistry)技术是通过化学或物理反应原理 显示组织切片细胞内某种化学成分，进行定位、定量及其与功能相关的研究。如糖类、脂类、 酶、核酸等与试剂发生化学物理反应，形成有色终末产物，在光镜下观察，有的可在电镜下观 察。 I.糖类显示多糖和蛋白多糖的常用方法是过碘酸-雪夫反应(periodic acid Schiff reaction,.PAS反应)·基本原理是过碘酸的氧化作用先使糖分子的乙二醇基变为乙二醛基，后 者继而与Schiffi试剂（无色亚硫酸品红复合物）结合，形成紫红色反应产物（图1-3）·颜色 反应的深浅取决于组织内多糖的乙二醇分子的多寡。 2．相差显微镜 相差显微镜（phase contrast microscope）是用于观察组织培养中活细胞形 态结构的。活细胞无色透明，一般光镜下不易分辨细胞轮廓及其结构。相差显微镜的特点是将 活细胞不同厚度及细胞内各种结构对光产生的不同折射作用，转换为光密度差异（明暗差）， 使镜下结构反差明显，影像清楚。组织培养研究常用的是倒置相差显微镜（inverted phase contrast microscope），它的光源和聚光器在载物台的上方，物镜在载物台的下方，便于观察 贴附在培养器皿底壁上的活细胞。 3．暗视野显微镜 暗视野显微镜（dark-field microscope）主要用于观察因反差或分辨力不 足的微小颗粒。此种显微镜主要是有一个暗视野集光器，使光线不直接进入物境，故呈暗视 野。而标本内的小颗粒产生的衍射光或散射光进入物镜，暗视野中的颗粒呈明亮小点，如同在 暗室可见一束光线中的微小尘粒一般。普通通光镜最大分辨率为0.2μm，暗视野显微镜则可分 辨0.004～0.2μm的微粒，适用于观察细胞内线粒体运动及标本中细菌等微粒的运动等。 4 ． 共 集 激 光 扫 描 显 微 镜 共 焦 激 光 扫 描 显 微 镜 （ confocal laser scanning microscope,CLSM）是近10年研制成的高光敏度、高分辨率的新型仪器。它以激光为光源，光 束经聚焦后落在样品（组织厚片或细胞）不同深度的微小一点，并作移动扫描，通过电信号彩 色显像，经过微机图像分析系统进行二维和三维分析处理。CLSM可对细胞进行三维结构图像 分析，细胞内各种荧光标记物的微量分析，细胞内Ca 2+、pH值等的动态分析测定，细胞的受 体移动、膜电位变化、酶活性和物质转运的测定，并以激光对细胞及其染色体进行切割、分 离、筛选和克隆。因此，CLSM是一种高技术产品，可对细胞的多种功能进行全自动、高效、 快速的微量定性和定量测定。 其他如偏光显微镜用于研究组织晶体物质及纤维等的光学性质，紫外光显微镜用于研究细 胞内核酸的分布与定量等。 （三）组织化学和细胞化学术 组织化学（histochemistry）和细胞化学（cytochemistry）技术是通过化学或物理反应原理 显示组织切片细胞内某种化学成分，进行定位、定量及其与功能相关的研究。如糖类、脂类、 酶、核酸等与试剂发生化学物理反应，形成有色终末产物，在光镜下观察，有的可在电镜下观 察。 1 ． 糖 类 显 示 多 糖 和 蛋 白 多 糖 的 常 用 方 法 是 过 碘 酸 － 雪 夫 反 应 （ periodic acid Schiff reaction,PAS反应）。基本原理是过碘酸的氧化作用先使糖分子的乙二醇基变为乙二醛基，后 者继而与Schiff试剂（无色亚硫酸品红复合物）结合，形成紫红色反应产物（图1－3）。颜色 反应的深浅取决于组织内多糖的乙二醇分子的多寡