而要分离杂交探针,则需先提取某一病原微生物株系的染色体DNA,后用限 制性内切酶进行酶解,得到的酶解片段克隆进一质粒载体,构建质粒文库,文库 中重组质粒的插入片段可用以分别同病原性微生物和非病原性微生物的核DNA 进行杂交、筛选。 技术应用: 目前,已有很多病毒基因探针可用于病毒病原学的研究,如乙型肝炎病毒 单纯疱疹病毒、巨细胞病毒、人乳头瘤病毒、腺病毒和轮状病毒等等。 人们用这些病毒基因探针检査血清、体液及相应组织中病毒基因,探讨病毒 基因与肿瘤和其它一些疾病的关系。我们曾应用 HFRSV探针检测HFRS尸检组织 中广泛分布有 HERSV。并与组织免疫复合物沉积、病毒抗原分布和病理变化结合 分析,以探讨HFRS的发病机理 核酸分子杂交在肿瘤学中主要用于探讨病毒基因与肿瘤发生的关系、检测肿 瘤组织中癌基因并探讨病毒致癌基因用于肿瘤病理诊断的可能性。 病毒基因与肿瘤的关系的研究较多,如鼻咽癌与HBV,传染性单核细胞增多 症、 Burkitts淋巴瘤与EBV,宫颈癌与HSV、HPV-16,肝癌与HBV等肿瘤性疾病 与病毒感染的关系。其方法主要是通过癌组织中病毒基因的检测来分析二者之间 的相关关系。 用核酸杂交检测癌组织及癌旁组织、癌前病变的癌基因的报道也很多。这些 研究的目的主要是探讨癌基因在其肿瘤发生学中的意义。研究曾从微量石蜡包埋 的胃癌组织中制备DNA,采用聚合酶链反应(PCR)和寡脱氧核苷酸(ODN)探 针杂交方法,检测我国胃癌患者组织中是否存在H-ras癌基因第12位密码子的 G-xT突变,结果在17例胃癌中有5例存在这种点突变。而7例胃溃疡无1例发 生突变,提示Hras癌基因第12位密码子的G>T突变可能导致胃癌中癌基因的 激活。 病毒致癌基因是被逆转录病毒所转导的,细胞致癌基因存在正常细胞内,它 可被特异的点突变、启动因子诱导,基因扩增和染色体的重排等激活,应用病毒 癌基因探针可检测细胞癌基因序列,一旦致癌机理被了解后,探针即可用于肿瘤 的"基因诊断"。 人类遗传病的诊断核酸杂交可用于人类遗传病的产前诊断。其方法是从羊水 中分离胚胎纤维母细胞或取绒毛膜细胞的DNA,经酶切以吸印法将DNA转移至 硝酸纤维滤膜上,与特异的基因探针杂交,从酶切图谱的变化可对某些遗传病做 出诊断。目前已能对60种生化遗传病做出产前诊断。经典的核酸杂交法为 Southern杂交,常用于疾病的产前诊断,如镰形细胞贫血、苯丙酮酸尿症、血友 病、假肥大性肌营养不良等等 带有分离片段的琼糖股 酶消化的DNA片段 X光片 交自呈影 Southern杂交而要分离杂交探针，则需先提取某一病原微生物株系的染色体 DNA，后用限 制性内切酶进行酶解，得到的酶解片段克隆进一质粒载体，构建质粒文库，文库 中重组质粒的插入片段可用以分别同病原性微生物和非病原性微生物的核 DNA 进行杂交、筛选。 二、技术应用： 目前，已有很多病毒基因探针可用于病毒病原学的研究，如乙型肝炎病毒、 单纯疱疹病毒、巨细胞病毒、人乳头瘤病毒、腺病毒和轮状病毒等等。 人们用这些病毒基因探针检查血清、体液及相应组织中病毒基因，探讨病毒 基因与肿瘤和其它一些疾病的关系。我们曾应用 HFRSV 探针检测 HFRS 尸检组织 中广泛分布有 HFRSV。并与组织免疫复合物沉积、病毒抗原分布和病理变化结合 分析，以探讨 HFRS 的发病机理。 核酸分子杂交在肿瘤学中主要用于探讨病毒基因与肿瘤发生的关系、检测肿 瘤组织中癌基因并探讨病毒致癌基因用于肿瘤病理诊断的可能性。 病毒基因与肿瘤的关系的研究较多，如鼻咽癌与 HBV，传染性单核细胞增多 症、Burkitt’s 淋巴瘤与 EBV，宫颈癌与 HSV、HPV-16，肝癌与 HBV 等肿瘤性疾病 与病毒感染的关系。其方法主要是通过癌组织中病毒基因的检测来分析二者之间 的相关关系。 用核酸杂交检测癌组织及癌旁组织、癌前病变的癌基因的报道也很多。这些 研究的目的主要是探讨癌基因在其肿瘤发生学中的意义。研究曾从微量石蜡包埋 的胃癌组织中制备 DNA，采用聚合酶链反应（PCR）和寡脱氧核苷酸（ODN）探 针杂交方法，检测我国胃癌患者组织中是否存在 H-ras 癌基因第 12 位密码子的 G->T 突变，结果在 17 例胃癌中有 5 例存在这种点突变。而 7 例胃溃疡无 1 例发 生突变，提示 H-ras 癌基因第 12 位密码子的 G->T 突变可能导致胃癌中癌基因的 激活。 病毒致癌基因是被逆转录病毒所转导的，细胞致癌基因存在正常细胞内，它 可被特异的点突变、启动因子诱导，基因扩增和染色体的重排等激活，应用病毒 癌基因探针可检测细胞癌基因序列，一旦致癌机理被了解后，探针即可用于肿瘤 的＂基因诊断＂。 人类遗传病的诊断核酸杂交可用于人类遗传病的产前诊断。其方法是从羊水 中分离胚胎纤维母细胞或取绒毛膜细胞的 DNA，经酶切以吸印法将 DNA 转移至 硝酸纤维滤膜上，与特异的基因探针杂交，从酶切图谱的变化可对某些遗传病做 出诊断。目前已能对 60 种生化遗传病做出产前诊断。经典的核酸杂交法为 Southern 杂交，常用于疾病的产前诊断，如镰形细胞贫血、苯丙酮酸尿症、血友 病、假肥大性肌营养不良等等。 Southern 杂交