核酸探针是指带有标记的某一特定DNA或RNA片段,用已知碱基序列的单 链核酸片段作为探针,与待测样本中的单链核酸互补配对,以判断有无互补的同 源核酸序列的存在 标记物 标记探针 杂交体 空登空 标记探针与为标记探针 最常用的探针是DNA探针,DNA探针又分为寡核苷酸探针、基因组DNA探 针和cDNA探针其优点在于,这类探针大多克隆在质粒载体中,可以无限繁殖制 备方法简便,且DNA探针相对不易被降解,一般DNA酶活性能有效的被抑制, 它的标记方法较成熟,有多种方法可供选择,如缺口平移法、随机引物法、PCR 标记法等,能用于放射性核素和非放射性物质标记 另一类探针是RNA探针,优点在于杂交效率髙稳定性髙,非特异性杂交较少 未杂交探针可以用 RNase降解,减少本底的干扰,但它易降解,而且标记方法较 为复杂 DNase I. Mg2 DNA酶I:在双链DNA 上随机打开若干个单 链缺口,产生3’-0 DNA聚合酶 dATP. dGTP dTTP [a-32PI-dCTP 大肠杆菌DNA聚合酶I 5,→3’DNA聚合酶 活性;5,→3,外切 核酸酶活性 变性 32P部分标记的 单链DNA片段 ↑切口原始位置 32P标记的DNA 个切口最终位置 缺口平移法原理图 缺口平移法的制作原理大致如上图所示,而下图是随机引物法的大致原理 图,随机引物是含有各种可能排列顺序的寡核苷酸片段的混合物,在下图过程中, 可见其保留了5′->3DNA聚合酶活性,弱3′->5′外切酶活性,无5′->3′外切酶活性 p-dNTP, Bio-Dntp Klenow, dNTP 3<uIl 随机引物法原理图核酸探针是指带有标记的某一特定 DNA 或 RNA 片段，用已知碱基序列的单 链核酸片段作为探针，与待测样本中的单链核酸互补配对，以判断有无互补的同 源核酸序列的存在。 最常用的探针是 DNA 探针，DNA 探针又分为寡核苷酸探针、基因组 DNA 探 针和 cDNA 探针其优点在于，这类探针大多克隆在质粒载体中，可以无限繁殖制 备方法简便，且 DNA 探针相对不易被降解，一般 DNA 酶活性能有效的被抑制， 它的标记方法较成熟，有多种方法可供选择，如缺口平移法、随机引物法、PCR 标记法等，能用于放射性核素和非放射性物质标记。 另一类探针是 RNA 探针，优点在于杂交效率高稳定性高，非特异性杂交较少， 未杂交探针可以用 RNase 降解，减少本底的干扰，但它易降解，而且标记方法较 为复杂。 缺口平移法的制作原理大致如上图所示，而下图是随机引物法的大致原理 图，随机引物是含有各种可能排列顺序的寡核苷酸片段的混合物，在下图过程中， 可见其保留了 5’->3’DNA 聚合酶活性，弱 3’->5’外切酶活性，无 5’->3’外切酶活性 标记探针与为标记探针 缺口平移法原理图 随机引物法原理图