基因工程原理实验指导 1.调整模板浓度至5ngdl: 2.按下列体系配制反应混合液，混匀，加一滴矿物油，离心5秒 Template DNA 2 ul 20 ng 10×buffer2.0ul MgCl2 25mM 1.5 ul Primer F(10uM)0.2 ul Primer R (10uM)0.2 ul dNTPs 2mM 2.0 u Taq 5U/ul 0.2 ul Add ddH2O to 11.9 ul 3.PCR反应循环条件设置： 95℃31 cycle 94℃1'57℃1'72℃1'30"35 cycles 72℃81 cycle 4℃forever 4.检测：加2l溴酚蓝，混匀，短暂离心，取15u反应产物点样电泳 5.在1%的琼脂糖凝胶上点样电泳。EB染色，紫外观察。 附注：1.引物设计应具有特异性，依靠引物设计软件进行引物设计：引物分装 成多管，不宜反复冻融多次： 2.PCR反应的各种成份不能遗漏，操作应戴手套，冰上操作： 3.根据引物的Tm值和扩增片段长度以及PCR仪的特性来设定PCR循环条 件： 4.注意分析电泳检测PCR产物时出现拖带或非特异性扩增带、无DNA带或 DNA带很弱的可能原因。 实验七植物总DNA的快速少量抽提(CTAB法) DNA分子是分子生物学研究的基本材料，依不同的实验目的可采取不同的抽提 方法获取数量和质量不等的DNA。 实验目的：了解植物DNA抽提的主要方法，掌握CTAB法快速抽提水稻 DNA。 实验材料及试剂：水稻叶片，1.5×CTAB,氯仿/异戊醇(24：1)，95%乙 醇或无水乙醇等 实验原理：植物DNA的抽提常采用两种方法： (1)SDS法：离子去污剂，过程长，纯度高： (2)CTAB法：该方法简便、快速，DNA产量高（纯度稍次，适用于一般 分子生物学操作)。CTAB是一种非离子去污剂，植物材料在CTAB的处理 14 基因工程原理实验指导 14 1．调整模板浓度至 5 ng/ µl ； 2．按下列体系配制反应混合液，混匀，加一滴矿物油，离心 5 秒 Template DNA 2 µl （ 20 ng ） 10 × buffer 2.0 µl MgCl2（ 25mM ） 1.5 µl Primer F (10µM) 0.2 µl Primer R (10µM) 0.2 µl dNTPs （ 2mM ） 2.0 µl Taq （ 5U/µl ） 0.2 µl Add ddH2O to 11.9 µl 3．PCR 反应循环条件设置： 95 ℃ 3' 1 cycle 94 ℃ 1' 57 ℃ 1' 72 ℃ 1'30" 35 cycles 72 ℃ 8' 1 cycle 4 ℃ forever 4．检测：加 2µl 溴酚蓝，混匀，短暂离心，取 15µl 反应产物点样电泳； 5．在 1% 的琼脂糖凝胶上点样电泳。EB 染色，紫外观察。 附注： 1．引物设计应具有特异性，依靠引物设计软件进行引物设计；引物分装 成多管，不宜反复冻融多次； 2．PCR 反应的各种成份不能遗漏，操作应戴手套，冰上操作； 3．根据引物的 Tm 值和扩增片段长度以及 PCR 仪的特性来设定 PCR 循环条 件； 4．注意分析电泳检测 PCR 产物时出现拖带或非特异性扩增带、无 DNA 带或 DNA 带很弱的可能原因。 实验七 植物总 DNA 的快速少量抽提（CTAB 法） DNA 分子是分子生物学研究的基本材料，依不同的实验目的可采取不同的抽提 方法获取数量和质量不等的 DNA 。 实验目的：了解植物 DNA 抽提的主要方法，掌握 CTAB 法快速抽提水稻 DNA 。 实验材料及试剂： 水稻叶片， 1.5 × CTAB ，氯仿 / 异戊醇 (24:1) ， 95% 乙 醇或无水乙醇等 实验原理：植物 DNA 的抽提常采用两种方法： （1） SDS 法： 离子去污剂，过程长，纯度高； （2） CTAB 法：该方法简便、快速， DNA 产量高 ( 纯度稍次，适用于一般 分子生物学操作 ) 。 CTAB 是一种非离子去污剂，植物材料在 CTAB 的处理