II、传代细胞培养与观察 一、实验目的 了解传代细胞的传代方法及操作过程，学习观察体外培养细胞的形态及生长状况 二、实验原理 传代培养是指细胞从一个培养瓶以 1：2 或 1：2 以上的比例转移，接种到另一培养瓶的 培养。 这种培养，第一步也是制备细胞悬液，当细胞长成致密单层时，它很容易被蛋白水解酶 和 EDTA)所破坏。所以—般采用胰蛋白酶和 EDTA(乙二胺四乙酸盐)的混合物，做为消化液。 细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。要使细胞能在体外长期生长， 必须满足两个基本要求：一是供给细胞存活所必需的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、 维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度和渗透压的调 节。二是严格控制无菌条件。 三、实验用品 1、器材 解剖剪、解剖镊、眼科剪(尖头、弯头)、眼科镊(尖头、弯头)、培养皿、量筒、试管、 锥形瓶、吸管、橡皮头、培养瓶(小方瓶或中方瓶)等。上述器材均须彻底清洗、烤干、包装 好，9．9xl04Pa(15 磅)灭菌 30min 备用。 此外，还有显微镜、血细胞计数器、血细胞计数板、酒精灯、酒精棉球、碘酒棉球、试 管架、标记笔、解剖板等。 2、试剂 L 磷酸盐缓冲液(PBs) 无钙、镁溶液 细胞消化液：o．5％胰蛋白酶和 o．4%EDTA EMEM 液