3%谷氨酰胺 o．5％台盘蓝染液等 3、材料 喉癌细胞 四、实验方法 在做传代细胞培养之前，首先将培养瓶置于显微镜下，观察培养瓶中细胞是否已长成致 密单层，如已长成单层，即可进行细胞的传代培养。 1.营养液配制: EMEM 液 90% 犊牛血清 10% 双抗(1 万单位／m1) 加至约 100 单位／m1 3％谷氛酞胺 1m1 7．4％NaHCO3 调 pH 至 6．8—7．0 2．换液: 在酒精灯旁打开瓶塞，倒去瓶中的细胞营养液。 3.消化与分装 在上述瓶中加入 1mlEDTA 溶液，轻轻摇动，将溶液倒出。重复上述动作。加入适量 消化液（0.02%EDTA 或 0.04％EDTA1ml 十 o．5％胰蛋白酶液 0.2ml）以盖满细胞为宜，置 于室温，停留 1—2min 后，翻转培养瓶，肉眼观察细胞单层是否出现缝隙(针孔大小的空隙)， 如出现缝隙，即可倒去消化液；如末出现缝隙，则可将瓶翻回，继续进行消化，直到出现缝 隙为让。此时，可倒去消化液，加入新配制的营养液 20m1。然后用吸管吸取培养瓶中的营 养液，反复吹打瓶壁上的细胞层至瓶壁细胞全部脱落下来为止。此时，可继续轻轻地吹打细 胞悬液，以使细胞散开。随之进行分装。 4．培养