分装好的细胞瓶上，做好标志，注明细胞代号、日期。置于培养架上，轻摇使细胞均匀分布， 以免堆积成团。然后置于 37℃培养。 5.观察 (1)观察体外培养细胞的几个问题； 细胞培养 24h 后，即可进行观察，观察的重点如下： A.首先要观察培养细胞是否污染。主要观察培养液颜色的变化及混浊度 B.观察培养姬颜色变化及细胞是否生长。 C.如细胞已生长，则要观察细胞的形态特征并判断其所处的生长阶段。观察时可参照(2)的 描述进行。 D．观察完毕，可用台盘蓝染液对细胞进行染色。以确定死、活细胞的比例。 (2)细胞的生长阶段及其形态特征 传代培养的细胞需逐日进行观察，注意细胞有无污染，培养液颜色的变化及细胞生长的 情况。—般中层培养的细胞，从培养开始，经过生长、繁殖、衰老及死亡的全过程。它是一 个连续的生长过程，但为了观察及描述，人为地将具分为 5 个时期，但各期间无明显绝对界 限。现分别描述如下： A．游离期：当细胞经消化分散成单个细胞后，由于细胞原生质的收缩相表面张力以及 细胞膜的弹性。所以，此时细胞多为圆形，折光率高，此期可延续数 h。 B．吸附期(贴壁)：由于细胞的附壁持性，细胞悬液静置培养一段时间(约 7—8h)后，便 附着在瓶壁上(此期不同细胞所需时间不同)。在显微镜下观察时可见瓶壁上有各种形态的细 胞，如圆形、扁形、短菱形。细胞的特点，大多立体感强，细胞内颗粒少，透明。 C.繁殖期：培养 l2h 以后直到 72h，细胞进入繁殖期，加速了细胞生长和分裂。此期包 括由几个细胞形成的细胞岛(即由少数细胞紧密聚集而呈现的孤立细胞群，常散在地分布在 瓶壁上)，到细胞铺满整个瓶壁(即所谓形成细胞单层)的过程。此期细胞形态为多角形(呈现 上皮样细胞的特征)。细胞特点：透明，颗粒较少，细胞间界限清楚，并可隐约见到细胞核。 根据细胞所占瓶壁有效面积的百分率，又可将其生长状况分为四级。以“十”的多少表示如下： 十：细胞占瓶壁有效面积(也就是细胞能生长的瓶壁面积)的 25％以内有新生细胞。一般